本文關(guān)鍵詞：藏系綿羊Smo基因皮膚特異表達(dá)載體及干擾載體的構(gòu)建及功能的初步分析

  更多相關(guān)文章： 藏系綿羊 Smo基因 真核載體 干擾載體 Gli1基因 Gsk3β基因

【摘要】：本研究的目的是構(gòu)建藏系綿羊Smo基因的皮膚特異表達(dá)真核載體及干擾載體,在細(xì)胞水平上探索該基因在毛囊細(xì)胞中可能發(fā)揮的調(diào)控機(jī)制,為進(jìn)一步研究藏系綿羊Smo基因在毛囊發(fā)育與周期變化中的功能提供理論基礎(chǔ)。試驗(yàn)以成年藏系綿羊?yàn)檠芯繉ο?從皮膚中克隆了Smo基因序列,根據(jù)基因的CDS區(qū)構(gòu)建了皮膚特異性真核表達(dá)載體及3個干擾載體,隨后轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的人毛囊內(nèi)根鞘細(xì)胞(Human hair inner root sheath cells,HHIRSC),利用熒光定量PCR技術(shù)檢測藏系綿羊Smo基因以及Smo基因所在Hh通路的兩個下游基因(Gli1、Gsk3β)m RNA水平的變化。主要研究成果如下:(1)獲得了藏系綿羊Smo基因的編碼區(qū)序列(CDS),長度為2342 bp。CDS區(qū)比對顯示,Smo基因與預(yù)測的綿羊Smo基因序列有3個堿基差異,編碼的蛋白質(zhì)序列有1個氨基酸差異。(2)以p CDs Red2-KI真核載體為基礎(chǔ),構(gòu)建了含KAP6.1皮膚特異表達(dá)啟動子的Smo基因重組真核載體p CDs Red2-KS;以線性質(zhì)粒pc DNA6.2-GW/Em GFP-mi R為主體,構(gòu)建了3個干擾載體。(3)將表達(dá)載體和3個干擾載體分別轉(zhuǎn)染HHIRSC,經(jīng)熒光定量PCR檢測轉(zhuǎn)染結(jié)果,顯示藏系綿羊Smo基因在轉(zhuǎn)染p CDs R-KS載體的HHIRSC中高表達(dá),并且Gli1基因、Gsk3β基因均在m RNA水平上顯著上調(diào)(P0.01);3個干擾載體對Smo基因均有98%以上的沉默效應(yīng),并且Gli1基因、Gsk3β基因均在m RNA水平上顯著下調(diào)(P0.01)。本研究結(jié)果表明,藏系綿羊皮膚特異真核表達(dá)載體p CDs R-KS和3個干擾載體均構(gòu)建成功,可用于Smo基因功能的細(xì)胞水平研究。研究結(jié)果提示,藏系綿羊Smo基因可能通過Hh通路影響毛囊的發(fā)育或周期變化。
【學(xué)位授予單位】：西南民族大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S826

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