本文關鍵詞：沙咪珠利抗柔嫩艾美耳球蟲作用機理的初步研究

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【摘要】：雞球蟲病是由艾美耳屬球蟲引起的一種原蟲病。其中,柔嫩艾美耳球蟲(Eimeria tenella,E.tenella)是致病性最強的病原之一,常造成很高的發(fā)病率和死亡率,每年給養(yǎng)禽業(yè)造成巨大的經(jīng)濟負擔。目前雞球蟲病防治以藥物為主,但耐藥性的產生給球蟲病的防治帶來很大困難。因此積極尋找新型的抗球蟲藥物及藥物作用機制的闡明迫在眉睫。沙咪珠利是本實驗室自主合成的一種新型三嗪類抗球蟲化合物,前期研究表明其具有廣闊的開發(fā)前景。為了解沙咪珠利的初步作用機制,我們探討了沙咪珠利抗E.tenella的作用階段和峰期、沙咪珠利對E.tenella超微結構的影響和主要作用位點,以及沙咪珠利對與作用位點功能相關的兩個重要代謝酶的影響。結果如下:1.在沙咪珠利抗E.tenella的作用階段和峰期研究中,采用分別在感染前2d(組1)、1d(組2)、感染當天(組3)、感染后1d(組4)、2d(組5)、3d(組6)、4d(組7)開始給予沙咪珠利,每組連續(xù)給藥3d,同時設置地克珠利對照組、感染對照組和空白對照組。結果,組1、組2和組3的抗球蟲指數(shù)(Anticoccidial Index,ACI)分別為104±11、92±11和125±16,基本無抗球蟲活性;組4、組5、組6和組7的ACI分別為170±8、191±5、171±4、161±5,達到中效和高效抗球蟲活性,而地克珠利對照組、感染對照組和空白對照組ACI分別為181±14、73±31和200±2。上述數(shù)據(jù)表明沙咪珠利在感染后第2d開始連續(xù)給藥3d抗球蟲活性最高,對應的藥物作用峰期為球蟲的裂殖生殖和配子生殖階段。2.在沙咪珠利對E.tenella超微結構影響和作用位點的研究中,采用在感染后不同時間點單次灌服15mg/kg沙咪珠利,給藥后16h剖殺雞只,采集盲腸組織,制作超薄切片并觀察,發(fā)現(xiàn)沙咪珠利對E.tenella裂殖生殖和配子生殖階段超微結構均有影響:第二代裂殖體和小配子體分化被抑制,裂殖子和小配子體外膜起泡和核周間隙膨大,且裂殖子形態(tài)多不規(guī)則。小配子體的異常外凸引起了小配子體的退化,大配子體中壁形成體2(Wall formation body 2,WFB2)異常,阻礙了卵囊壁形成,進一步引起合子退化。此外,線粒體、內質網(wǎng)、高爾基體也發(fā)生了不同程度的異常。3.烯醇酶(enolase)是一個多功能蛋白,在除糖酵解以外的其它多種生物學過程中也發(fā)揮著重要作用。為了解enolase在E.tenella中的藥物影響和相關功能,我們分別采用了Real-time PCR、Western Blot和免疫熒光探索了沙咪珠利對E.tenella第二代裂殖子enolase的影響。結果表明沙咪珠利在轉錄和翻譯水平上均下調了enolase的表達;免疫熒光分析顯示enolase主要分布于第二代裂殖子的頂端,且與對照組相比,沙咪珠利組熒光強度明顯減弱。4.乳酸脫氫酶(LDH)是糖酵解中一個重要的蛋白酶,在多數(shù)寄生蟲研究中有著重要的意義。本試驗通過Real-time PCR、Western Blot、免疫熒光、LDH活性檢測和caspase3活性測定的分子手段研究了沙咪珠利對E.tenella第二代裂殖子LDH的影響。結果表明,LDH主要分布在第二代裂殖子的胞漿中,且沙咪珠利作用后LDH在轉錄水平和翻譯水平上表達均下調,裂殖子胞漿和胞核LDH活性均降低,但caspase3活性顯著升高。綜上所述,這些發(fā)現(xiàn)讓我們對沙咪珠利的作用機制有了初步了解,也為我們進一步探索其作用機制奠定了基礎。
【學位授予單位】：中國農業(yè)科學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S859.795

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

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本文編號：1167223