本文關(guān)鍵詞：一種新型鴨呼腸孤病毒SYBR GreenⅡ熒光定量PCR方法的建立

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【摘要】：該研究旨在建立一種快速、敏感和特異性檢測(cè)新型鴨呼腸孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)的熒光定量PCR診斷方法。本實(shí)驗(yàn)以感染新型鴨呼腸孤病毒的鴨組織RNA提取物為模板,根據(jù)Gen Bank數(shù)據(jù)庫(kù)中呼腸孤病毒S1基因全序列,設(shè)計(jì)合成了一對(duì)特異性引物,PCR擴(kuò)增基因片段,將其克隆至p ET-30a載體,重組質(zhì)粒測(cè)序并進(jìn)行同源性分析;以陽(yáng)性質(zhì)粒為模板,建立SYBR Green II熒光定量PCR檢測(cè)方法,并進(jìn)行敏感性和特異性檢測(cè)。經(jīng)測(cè)序證實(shí)擴(kuò)增片段與預(yù)期目的片段相符,所建立的SYBR Green II熒光定量PCR檢測(cè)S1的反應(yīng)在101~108 copies/u L之間具有良好的線性關(guān)系,反應(yīng)的檢出下限為10 copies/μL,而H5型禽流感病毒、H9型禽流感病毒、雞傳染性支氣管炎病毒、C型鴨肝炎病毒、新城疫病毒、鵝細(xì)小病毒、鴨瘟病毒等病毒的檢測(cè)為陰性,表明該方法敏感、特異。本研究成功建立了SYBR Green II熒光定量PCR檢測(cè)新型鴨呼腸孤病毒的方法,為新型鴨呼腸孤病毒致病機(jī)制和機(jī)體免疫保護(hù)機(jī)制的研究提供了技術(shù)平臺(tái)。
【作者單位】： 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所;甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院;
【基金】：上海市科委創(chuàng)新項(xiàng)目(13391901600) 國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31270194)
【分類號(hào)】：S852.65
【正文快照】： DETECTION OF NOVEL DUCK REOVIRUS USING SYBR GREEN IIFLUORESCENT QUANTITATIVE PCR ASSAYDING Ming-yang1,2,QI Wei-qiang1,2,CHEN Zong-yan1,ZHU Jie1,WU Qiao-mei1,MIAO Qiu-hong1,LI Chuan-feng1,WU Run1,LIU guang-qing1(1.Shanghai Veterinary Research Institute,CA

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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6 劉思伽,凌育q，

本文編號(hào)：1166664