本文關鍵詞：一種新型鴨呼腸孤病毒SYBR GreenⅡ熒光定量PCR方法的建立

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【摘要】：該研究旨在建立一種快速、敏感和特異性檢測新型鴨呼腸孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)的熒光定量PCR診斷方法。本實驗以感染新型鴨呼腸孤病毒的鴨組織RNA提取物為模板,根據(jù)Gen Bank數(shù)據(jù)庫中呼腸孤病毒S1基因全序列,設計合成了一對特異性引物,PCR擴增基因片段,將其克隆至p ET-30a載體,重組質(zhì)粒測序并進行同源性分析;以陽性質(zhì)粒為模板,建立SYBR Green II熒光定量PCR檢測方法,并進行敏感性和特異性檢測。經(jīng)測序證實擴增片段與預期目的片段相符,所建立的SYBR Green II熒光定量PCR檢測S1的反應在101~108 copies/u L之間具有良好的線性關系,反應的檢出下限為10 copies/μL,而H5型禽流感病毒、H9型禽流感病毒、雞傳染性支氣管炎病毒、C型鴨肝炎病毒、新城疫病毒、鵝細小病毒、鴨瘟病毒等病毒的檢測為陰性,表明該方法敏感、特異。本研究成功建立了SYBR Green II熒光定量PCR檢測新型鴨呼腸孤病毒的方法,為新型鴨呼腸孤病毒致病機制和機體免疫保護機制的研究提供了技術(shù)平臺。
【作者單位】： 中國農(nóng)業(yè)科學院上海獸醫(yī)研究所;甘肅農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院;
【基金】：上海市科委創(chuàng)新項目(13391901600) 國家自然科學基金項目(31270194)
【分類號】：S852.65
【正文快照】： DETECTION OF NOVEL DUCK REOVIRUS USING SYBR GREEN IIFLUORESCENT QUANTITATIVE PCR ASSAYDING Ming-yang1,2,QI Wei-qiang1,2,CHEN Zong-yan1,ZHU Jie1,WU Qiao-mei1,MIAO Qiu-hong1,LI Chuan-feng1,WU Run1,LIU guang-qing1(1.Shanghai Veterinary Research Institute,CA

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本文編號：1166664