本文關(guān)鍵詞：茶多酚和殼聚糖對(duì)豬精液常溫保存效果的研究

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【摘要】：精液在常溫保存的過程中會(huì)產(chǎn)生活性氧(ROS),正常情況下ROS的產(chǎn)生和精子的抗氧化能力處于平衡狀態(tài),只有少部分ROS用于精子正常功能如精子獲能、頂體反應(yīng)和受精時(shí)與卵母細(xì)胞融合等。過多的ROS將會(huì)攻擊精子質(zhì)膜,發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng),影響精子功能。另外,細(xì)菌在精液保存中同樣會(huì)對(duì)精子產(chǎn)生破壞作用,影響精子正常獲能,降低母畜受孕率。為了提高豬精液常溫保存的效果,本研究在豬精液常溫保存稀釋液中添加抗氧化及抗菌物質(zhì)——茶多酚與殼聚糖,檢測(cè)精子活率、質(zhì)膜完整率、頂體完整率、丙二醛(MDA)含量、總抗氧化能力(T-AOC)和細(xì)菌含量,以篩選最適添加濃度并探究其抗菌機(jī)制。本研究主要獲得以下結(jié)果:1.在豬精液常溫保存基礎(chǔ)稀釋液中分別加入不同濃度(0.01、0.02、0.04、0.08和0.16 g/L)的茶多酚,試驗(yàn)結(jié)果表明,0.01、0.02、0.04和0.08 g/L的茶多酚均能提高精液保存效果。其中,當(dāng)茶多酚添加濃度為0.04 g/L時(shí),精液保存6 d后,精子活率、質(zhì)膜完整率、頂體完整率分別為60.02%,46.40%,75.25%,顯著高于其他組(P0.05),MDA含量為2.39 nmol/L,顯著低于其他組(P0.05),T-AOC為2.31 U/m L高于其他組,但組間差異不顯著(P0.05)。茶多酚對(duì)精液中細(xì)菌生長(zhǎng)有抑制作用,精液保存4~6 d時(shí),細(xì)菌增長(zhǎng)速度顯著低于對(duì)照組(P0.05),說明0.04 g/L的茶多酚對(duì)豬精液常溫保存有益。2.在豬精液常溫保存基礎(chǔ)稀釋液中分別加入不同濃度(0.05、0.1、0.2、0.4和0.8 g/L)的殼聚糖,表明隨著殼聚糖濃度的增加,精液保存效果呈先增后減的趨勢(shì)。保存6 d后,添加濃度為0.1 g/L與0.2 g/L的處理組精子活率均顯著高于其他組(P0.05)。其中,當(dāng)添加濃度為0.1 g/L時(shí),精子活率為61.56%,高于0.2 g/L處理組,但組間差異不顯著(P0.05)。另外,0.1 g/L殼聚糖能顯著提高精子質(zhì)膜完整率、頂體完整率和T-AOC活性,顯著降低MDA含量和精液中的細(xì)菌含量(P0.05),而添加濃度為0.8 g/L時(shí),精子各項(xiàng)指標(biāo)顯著低于其他組(P0.05)。因此,殼聚糖在豬精液常溫保存稀釋液中的最佳濃度為0.1 g/L。3.精液保存6 d后,0.04 g/L茶多酚和0.05 g/L殼聚糖組合效果最佳,精子活率和質(zhì)膜完整率分別為67.4%和54.07%,顯著高于單獨(dú)添加茶多酚和殼聚糖處理組(P0.05)。與對(duì)照組相比,聯(lián)合使用茶多酚-殼聚糖能顯著降低精液中的細(xì)菌含量,提高精液中的SOD、CAT和GSH-PX的活性(P0.05),但與單獨(dú)添加茶多酚和殼聚糖相比,GSH-PX活性提高效果不顯著(P0.05)。將單獨(dú)添加茶多酚和殼聚糖時(shí)的最佳濃度(0.04 g/L和0.1 g/L)組合發(fā)現(xiàn),精液中的細(xì)菌含量顯著降低(P0.05),但精子活率、質(zhì)膜完整率和三種酶活性顯著低于其他組(P0.05)。4.用茶多酚-殼聚糖復(fù)合劑處理大腸桿菌,大腸桿菌細(xì)胞膜皺縮甚至破裂,內(nèi)容物外溢。同時(shí)可以觀察到有部分顆粒物品進(jìn)入細(xì)菌胞內(nèi),部分細(xì)菌還出現(xiàn)空斑。通過SDS-PAGE測(cè)定細(xì)菌總蛋白試驗(yàn)結(jié)果表明,處理2 h后20 kDa和50~70 kDa區(qū)域蛋白條帶減弱較明顯,6 h后蛋白條帶穩(wěn)定,與對(duì)照組相比有不同程度地減弱,其中35 kDa以下條帶幾乎消失,可以斷定大腸桿菌蛋白表達(dá)受到嚴(yán)重抑制。因此,0.04 g/L茶多酚組合0.05 g/L殼聚糖能對(duì)大腸桿菌有較強(qiáng)破壞作用,主要通過破壞細(xì)胞膜進(jìn)而破壞細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核,阻礙其蛋白表達(dá)。
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S828

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2 王冬寶;豬精液不同方式保存活力觀測(cè)[J];養(yǎng)殖技術(shù)顧問;2002年12期

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本文編號(hào)：1163247