發(fā)布時間：2017-11-09 13:32

  本文關(guān)鍵詞：海藻糖對奶山羊睪丸組織冷凍保存效果的影響

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【摘要】：睪丸組織冷凍保存是一項(xiàng)正在逐步發(fā)展的現(xiàn)代繁殖技術(shù),其為動物種質(zhì)資源的保存提供了新的方法和思路。海藻糖是一種具有抗冷凍、抗高滲和低毒性的非還原糖,已廣泛應(yīng)用于組織和細(xì)胞的冷凍保存技術(shù)中。然而,關(guān)于海藻糖對奶山羊睪丸組織冷凍保存效果的影響未見相關(guān)報道。為探索適宜用于奶山羊睪丸組織冷凍保存的滲透性冷凍保護(hù)劑以及海藻糖對奶山羊睪丸組織冷凍保存效果的影響,本研究將關(guān)中奶山羊睪丸切碎后分別冷凍保存于含有不同濃度二甲基亞砜(DMSO)、甘油和丙二醇的冷凍保護(hù)液中,于凍存前后,分別測定奶山羊睪丸組織的總細(xì)胞活力、間質(zhì)細(xì)胞活力和小管上皮細(xì)胞活力,篩選出適宜用于奶山羊睪丸組織冷凍保存的滲透性冷凍保護(hù)劑及其適宜濃度。然后,在篩選出的基礎(chǔ)冷凍保護(hù)液中添加不同濃度的海藻糖,于凍存前后,分別測定奶山羊睪丸組織的總細(xì)胞活力、間質(zhì)細(xì)胞活力和小管上皮細(xì)胞活力;凍存后睪丸組織體外培養(yǎng)后收集培養(yǎng)液測定培養(yǎng)液中的睪酮含量;制作石蠟組織切片觀察凍存前后睪丸組織的形態(tài)結(jié)構(gòu);原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記技術(shù)(TUNEL)染色檢測凍存前后睪丸組織細(xì)胞的凋亡情況;檢測凍存前后睪丸組織的總抗氧化(T-AOC)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性、過氧化氫酶(CAT)活性、谷胱甘肽(GSH)含量和丙二醛(MDA)含量等抗氧化能力相關(guān)指標(biāo);運(yùn)用real-time PCR檢測凍存前后睪丸組織Bax、Bcl-2、HSP70-2、Boule和CREM基因的表達(dá)量。本研究主要獲得如下結(jié)果:1.與新鮮睪丸組織相比,凍存后奶山羊睪丸組織的總細(xì)胞活力、間質(zhì)細(xì)胞活力和小管上皮細(xì)胞活力顯著下降(P0.05)。在冷凍保護(hù)液中添加DMSO時,凍存后奶山羊睪丸組織的總細(xì)胞活力、間質(zhì)細(xì)胞活力和小管上皮細(xì)胞活力分別高于甘油組和丙二醇組。在冷凍保護(hù)液中添加丙二醇時,凍存后奶山羊睪丸組織的總細(xì)胞活力、間質(zhì)細(xì)胞活力和小管上皮細(xì)胞活力顯著高于甘油組(P0.05)。同時,在冷凍保護(hù)液中添加10%DMSO時,凍存后奶山羊睪丸組織的總細(xì)胞活力、間質(zhì)細(xì)胞活力和小管上皮細(xì)胞活力最高,分別為66.41%、66.76%和65.87%。2.與對照組相比,添加不同濃度海藻糖的冷凍保護(hù)液能夠顯著提高凍存后奶山羊睪丸組織的總細(xì)胞活力、間質(zhì)細(xì)胞活力和小管上皮細(xì)胞活力(P0.05)。同時,在冷凍保護(hù)液中添加15%海藻糖時,凍存后奶山羊睪丸組織的總細(xì)胞活力、間質(zhì)細(xì)胞活力和小管上皮細(xì)胞活力顯著高于其他試驗(yàn)組(P0.05)。在冷凍保護(hù)液中添加海藻糖對奶山羊睪丸組織的睪酮分泌能力有一定的保護(hù)作用,并且在冷凍保護(hù)液中添加15%海藻糖時,睪酮分泌能力顯著高于其他試驗(yàn)組(P0.05)。另外,冷凍保存過程對奶山羊睪丸組織的組織結(jié)構(gòu)有一定的破壞作用。在冷凍保護(hù)液中添加海藻糖能夠保護(hù)奶山羊睪丸組織結(jié)構(gòu)的完整性,同時,在冷凍保護(hù)液中添加15%海藻糖時,其對于睪丸組織結(jié)構(gòu)完整性的保護(hù)作用較好。冷凍保存過程會引起奶山羊睪丸組織細(xì)胞的凋亡。與對照組相比,在冷凍保護(hù)液中添加海藻糖能顯著降低睪丸組織中凋亡細(xì)胞的數(shù)量(P0.05)。同時,在冷凍保護(hù)液中添加15%海藻糖時,凍存后奶山羊睪丸組織凋亡細(xì)胞的數(shù)量最少,然而與添加20%海藻糖的試驗(yàn)組差異不顯著(P0.05)。3.與新鮮睪丸組織相比,凍存后奶山羊睪丸組織T-AOC活性、SOD活性、CAT活性和GSH含量顯著下降(P0.05),MDA含量顯著上升(P0.05)。在冷凍保護(hù)液中添加海藻糖時,凍存后奶山羊睪丸組織T-AOC活性、SOD活性、CAT活性和GSH含量均顯著高于對照組(P0.05),MDA含量顯著低于對照組(P0.05)。在冷凍保護(hù)液中添加15%海藻糖時,凍存后奶山羊睪丸組織T-AOC活性、SOD活性、CAT活性和GSH含量均高于其他試驗(yàn)組,MDA含量顯著低于其他試驗(yàn)組(P0.05)。4.與新鮮睪丸組織相比,凍存后奶山羊睪丸組織Bax基因表達(dá)量顯著升高(P0.05);Bcl-2、HSP70-2、Boule和CREM基因表達(dá)量顯著下降(P0.05)。在冷凍保護(hù)液中添加海藻糖時,凍存后奶山羊睪丸組織Bax基因表達(dá)量顯著低于對照組(P0.05);Bcl-2、HSP70-2、Boule和CREM基因表達(dá)量顯著高于對照組(P0.05)。同時,在冷凍保護(hù)液中添加15%海藻糖時,凍存后奶山羊睪丸組織Bax基因表達(dá)量顯著低于其他試驗(yàn)組(P0.05);Bcl-2、HSP70-2、Boule和CREM基因表達(dá)量高于其他試驗(yàn)組。
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S827

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1162111