本文關鍵詞：SREBP1基因在水牛乳腺上皮細胞中的功能研究

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【摘要】：水牛奶較荷斯坦牛奶具有更豐富的蛋白質、脂肪、維生素等營養(yǎng)物質,是人類生活的理想食品。固醇調節(jié)元件結合蛋白1(Sterol regulatory element-binding protein 1. SREBP1)是人和動物乳脂肪合成的核心轉錄因子,主要通過調控參與乳脂肪合成的多種酶和轉運蛋白的表達活性,影響乳腺上皮細胞甘油三脂的合成和分泌。本研究利用qRT-PCR技術證實乳脂肪球(milk fat globule, MFG)能夠用于體內乳腺上皮細胞基因的表達研究；利用RNAi技術和脂肪酸處理方法證明SREBP1基因參與了乳脂肪合成過程中各種酶和轉運蛋白的調控,SREBP1基因可能作用于ERK1/ERK2信號通路從而調控PPAR y基因的表達。本研究為進一步探討水牛乳脂肪合成的分子機制提供了理論依據(jù)。獲得的主要研究結果如下：1.MFG中的總RNA主要來源于乳腺上皮細胞,且可以用于體內乳腺上皮細胞功能基因的表達研究。在MFG、乳汁體細胞(MSC)、乳腺組織(MG)轉錄本的對比中,脂肪細胞特異基因(AdipoQ),白細胞特異基因(CSF1、ILla、CD43)在MFG中沒有表達；上皮細胞標志基因(Keratin 8、Keratin 18)的表達高于MSC但低于MG;成纖維細胞標志基因(vimentin)在MFG中的表達低于MSC和MG;乳蛋白基因(LALBA、BLG、CSN2)和乳脂肪合成相關基因(ACACA、 BTN1A1、FABP3、FAS)在MFG中的表達均高于MSC和MG。2.利用乳脂肪球為材料成功克隆出SREBP1和PPARγ基因CDS全序列,長度分別為3438bp和1428bp。3.本研究成功分離了乳腺上皮細胞并進行了傳代。分離的乳腺上皮細胞具有典型的鵝卵石樣形態(tài),出現(xiàn)圓屋頂樣、乳頭樣結構,能夠分泌乳滴,生長曲線呈現(xiàn)典型的S型,免疫細胞化學證明具有角蛋白18和波形蛋白的表達。4. SREBP1基因參與了乳脂肪合成過程中各種的酶和轉運蛋白的調控。研究發(fā)現(xiàn)shRN A-SREB P1慢病毒顆粒感染水牛乳腺上皮細胞后,SREBP1基因下調45%,培養(yǎng)基中甘油三酯濃度極顯著高于陰性感染組(P0.01)。脂肪酸處理乳腺上皮細胞后發(fā)現(xiàn),添加油酸組或硬脂酸組培養(yǎng)基中甘油三酯濃度極顯著高于對照組(P0.01),軟脂酸組極顯著低于對照組(P0.01)；油紅O染色結果顯示油酸和硬脂酸能夠抑制乳腺上皮細胞脂滴的生成,軟脂酸能夠促進脂滴的生成；qRT-PCR結果顯示SREBP1基因在油酸組和硬脂酸組的表達下調,在軟脂酸組表達上調。經(jīng)過shRNA-SREBP1慢病毒顆粒感染和脂肪酸處理后,ACACA、FABP3、FAS、SCD、ERK1、ERK2、PPARγ、Insig1基因表達量與SREBP1基因表達趨勢一致。這表明SREBP1基因是乳脂肪合成調控的核心調控因子,SREBP1基因可能作用于ERK1/ERK2信號通路從而調控PPAR γ基因的表達。
【學位授予單位】：廣西大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S823.83

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本文編號：1160625