發(fā)布時間：2017-11-08 13:28

  本文關(guān)鍵詞：氟對小鼠睪丸組織及間質(zhì)細胞自噬的體內(nèi)外觀察

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【摘要】：[目的]多年來對氟的研究表明,氟對雄性生殖系統(tǒng)的損傷是多方面的,但機理不十分明確。本研究旨在探討氟對小鼠睪丸中自噬及相關(guān)調(diào)控基因和蛋白表達的影響,為進一步探討氟致雄性生殖系統(tǒng)的損傷機理提供理論依據(jù)。[方法]體內(nèi)試驗選用8周齡的性成熟雄性昆明小鼠48只,隨機分成4組,每組12只,分別為對照組、低氟組、中氟組和高氟組。采用飲水染氟的方法,對照組給予去離子水,染氟組分別給予含有25、50、100mg/L NaF的去離子水,飼喂60天后,斷頸法處死小鼠,取其睪丸組織,分別采用qRT-PCR、Western Blot方法檢測自噬及其調(diào)控相關(guān)基因及蛋白的表達量變化,并用MDC染色方法對自噬體進行觀察。體外試驗采用小鼠睪丸間質(zhì)細胞原代培養(yǎng)技術(shù),進行NaF染毒實驗,攻毒劑量分別為0、0.125、0.25、0.5mM,染毒24小時后,提取間質(zhì)細胞總RNA,利用qRT-PCR技術(shù)檢測自噬及其調(diào)控相關(guān)基因的mRNA表達變化。[結(jié)果]1.體內(nèi)試驗(1)小鼠睪丸組織切片的MDC染色顯示,隨攻氟劑量的增加,自噬體形成逐漸增多,且氟對間質(zhì)細胞自噬體形成的影響較大。(2)應(yīng)用qRT-PCR技術(shù)檢測小鼠睪丸中自噬及其調(diào)控相關(guān)基因的mRNA表達,結(jié)果顯示,Beclinl和Atg5的mRNA表達量與對照組相比沒有顯著變化；LC3和p62的mRNA表達量在中氟組和高氟組顯著升高(P0.05, P0.01); PI3K和AKT在中氟組和高氟組的表達量顯著降低(P0.01, P0.05); AMPK的表達量高氟組顯著升高(P0.05); mTOR、PDK1、TSC、ULK1和Atg13基因的表達量與對照組相比無明顯差異。(3)應(yīng)用Western Blot技術(shù)對小鼠睪丸中自噬相關(guān)蛋白LC3Ⅱ和p62以及自噬調(diào)控蛋白p-mTOR的表達量進行分析,結(jié)果表明：各攻氟組LC3Ⅱ的蛋白表達量與對照組相比均升高,其中低氟組和高氟組差異極顯著(P0.001),高氟組差異顯著(P0.05)；p62的蛋白表達量在中氟組和高氟組顯著降低(P0.01);p-mTOR的表達量在中氟組和高氟組降低,且差異顯著(P0.01,P0.05)。2.體外試驗(1)小鼠睪丸間質(zhì)細胞的MDC染色顯示,隨攻氟劑量的增加,間質(zhì)細胞中自噬體形成逐漸增多。(2)應(yīng)用qRT-PCR技術(shù)對小鼠睪丸間質(zhì)細胞中自噬相關(guān)基因LC3、p62、Beclin1和Atg5的mRNA表達進行檢測,結(jié)果顯示,各基因的表達量均有上升趨勢,其中LC3、p62和Atg5在中氟組及高氟組差異顯著(P0.05,P0.01,P0.001),而Beclin1僅在高氟組有顯著差異(P＜0.05)。(3)應(yīng)用qRT-PCR技術(shù)對小鼠睪丸間質(zhì)細胞中AKT/AMPK-mTOR通路相關(guān)基因PI3K、AKT、AMPK、mTOR、PDK1、TSC、ULK1和Atg13的mRNA表達進行檢測,結(jié)果表明,PI3K、AKT、mTOR和PDKl的表達量降低,且PI3K在中氟組差異顯著,AKT和PDK1在高氟組差異顯著,mTOR在中氟及高氟組差異均顯著(P0.05);AMPK、 TSC、Atg13的表達量升高,且AMPK、Atg13在高氟組差異顯著(P0.05), TSC在各攻氟組均有顯著差異(P0.05,P0.01); ULK1的表達量無明顯變化。[結(jié)論]本次試驗結(jié)果表明,氟暴露可以促進小鼠睪丸組織及間質(zhì)細胞的自噬體形成,并且對睪丸間質(zhì)細胞的影響較大,該影響可能是由AKT/AMPK-mTOR信號通路介導(dǎo)的。
【學(xué)位授予單位】：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S859.8

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