牛布魯氏菌病熒光標(biāo)記免疫層析試紙條檢測技術(shù)研究
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更多相關(guān)文章: 布魯氏菌病 熒光標(biāo)記抗體 免疫試紙條 快速檢測
【摘要】:布魯氏菌病是一種流行范圍廣、危害嚴(yán)重的人畜共患傳染病。近年來,由布魯氏菌感染導(dǎo)致的人畜疫情在國內(nèi)外均出現(xiàn)回升勢頭,嚴(yán)重影響了養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)發(fā)展,并引發(fā)嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題。該病的快速準(zhǔn)確檢測可為疫病防治提供有效的疫病信息,是布魯氏菌病早期防控的關(guān)鍵。鑒于此,建立一種快速和有效的檢測方法十分必要。首先將布魯氏菌pCold-TF/OMP19、pCold-TF/OMP22和pCold-TF/OMP28重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到E.coli BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞進行表達(dá),通過親和層析純化,獲得高純度可溶性重組蛋白OMP19、OMP22和OMP28。然后采用ELISA方法對這三種重組蛋白進行驗證,表明三種蛋白組合能與牛布魯氏菌病標(biāo)準(zhǔn)陽性血清發(fā)生較好的特異性反應(yīng);之后,利用純化的融合抗原,通過對各種固相材料的選擇和反應(yīng)體系及反應(yīng)條件的優(yōu)化,建立了一種基于熒光標(biāo)記抗體的牛布魯氏菌病免疫層析試紙條檢測方法,并應(yīng)用于牛布魯氏菌病抗體的快速檢測中。熒光標(biāo)記的牛布魯氏菌病免疫層析試紙條最低能檢測到1:100的稀釋度;與牛的結(jié)核病、藍(lán)舌病、病毒性腹瀉、口蹄疫、巴氏桿菌病、白血病,不發(fā)生交叉反應(yīng);應(yīng)用該試紙條與商品化的IDEXX試劑盒對200份臨床樣本進行檢測比較,結(jié)果與IDEXX試劑盒的符合率為93.5%。本試驗建立的牛布魯氏菌病熒光標(biāo)記免疫層析試紙條方法,具有良好的特異性、敏感性和重復(fù)性,能快速檢測出牛血清中的布魯氏菌病抗體,是一種適合現(xiàn)場初篩的檢測方法。
【學(xué)位授予單位】:內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2016
【分類號】:S858.23
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,本文編號:1145670
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