本文關(guān)鍵詞：Anti-ECL1抗體阻斷J亞群禽白血病病毒感染及組織保護(hù)研究

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【摘要】：鈉氫離子交換蛋白(NHE)是廣泛存在于細(xì)胞膜的跨膜蛋白,具有pHi調(diào)定點(diǎn),決定胞內(nèi)pHi水平,對(duì)細(xì)胞內(nèi)外環(huán)境穩(wěn)態(tài),細(xì)胞行為調(diào)節(jié)的發(fā)生和發(fā)展以及組織損傷具有密切關(guān)系。NHE的9個(gè)同種型分別在不同的組織和細(xì)胞分布。NHE1是目前研究最為清楚的一個(gè)同種型,此外NHE1對(duì)組織損傷具有重要作用,尤其在心肌中。2006年雞的NHE1(chNHE1)被證明是ALV-J受體。J亞群禽白血病病毒(ALV-J)為RNA病毒,能夠引起組織損傷,生長(zhǎng)抑制,生產(chǎn)性能下降及腫瘤,但由于自身的超突變性以及引起疾病的復(fù)雜性,至今未研究清楚其感染機(jī)制和有效的疫苗或者藥物,嚴(yán)重危害了我國(guó)養(yǎng)禽業(yè)。ALV-J的感染過(guò)程,首先由Env與受體ch NHE1相互作用,進(jìn)而引起組織損傷和生產(chǎn)性能下降等各種癥狀。chNHE1與Env直接結(jié)合,隨后Env跨膜區(qū)(TM)構(gòu)象發(fā)生改變來(lái)促進(jìn)病毒與細(xì)胞的融合,該步驟是病毒進(jìn)入細(xì)胞的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。ch NHE1第一膜外環(huán)(ECL1)是最大膜外環(huán),因此阻斷ECL1受體可能阻斷ALV-J的感染,從而減輕機(jī)體的組織損傷程度。那么chNHE1對(duì)ALV-J誘導(dǎo)的組織損傷是否具有決定性作用?這一問(wèn)題值得深入探究。本研究擬通過(guò)制備chNHE1第一膜外環(huán)抗體,檢測(cè)其阻斷ALV-J感染的效果及組織的保護(hù)作用效果,從而明確chNHE1在ALV-J誘導(dǎo)組織損傷中的決定性作用。我們首先從SPF雞的腎臟中獲得ECL1基因并制備Anti-ECL1抗體,設(shè)置4個(gè)組:A(Normal組)、B(Anti-ECL1組)、C(ALV-J組)、D(ALV-J+Anti-ECL1組);將Anti-ECL1抗體經(jīng)細(xì)胞毒性檢測(cè),確保對(duì)細(xì)胞無(wú)損傷情況下,將Anti-ECL1抗體和ALV-J同時(shí)作用于細(xì)胞,分別通過(guò)熒光定量PCR方法和ELISA方法檢測(cè)Anti-ECL1抗體阻斷ALV-J感染的效果,檢測(cè)結(jié)果表明在48h內(nèi),D組(ALV-J+Anti-ECL1)ALV-J NX0101 RNA拷貝數(shù)顯著低于C組(ALV-J),隨時(shí)間的延長(zhǎng),D組(ALV-J+Anti-ECL1)ALV-J NX0101RNA拷貝數(shù)與C組(ALV-J)無(wú)差異;ELISA檢測(cè)ALV-J抗原p27表達(dá)水平在72h內(nèi)顯著低于C組,證明Anti-ECL1抗體在限定的時(shí)間內(nèi)可有效阻斷ALV-J感染DF-1細(xì)胞。擬通過(guò)給ALV-J感染雞注射Anti-ECL1抗體,檢測(cè)Anti-ECL1抗體對(duì)ALV-J感染雞組織器官的保護(hù)效果,相對(duì)定量PCR和免疫組織化學(xué)結(jié)果表明,D組(ALV-J+Anti-ECL1)ALV-J NX0101拷貝數(shù)與C組(ALV-J)相比顯著降低,且D組(ALV-J+Anti-ECL1)ALV-J抗原表達(dá)水平降低;在肝臟中D組(ALV-J+Anti-ECL1)ALV-JNX0101拷貝數(shù)顯著降低,但ALV-J抗原表達(dá)水平無(wú)明顯變化,結(jié)果表明Anti-ECL1抗體對(duì)感染ALV-J雞的心臟和肝臟具有保護(hù)作用,但對(duì)其他組織器官保護(hù)作用不顯著,據(jù)此我們推測(cè)Anti-ECL1抗體對(duì)組織器官的保護(hù)能力與ALV-J對(duì)組織器官的靶向性相關(guān)。為驗(yàn)證chNHE1在ALV-J感染雞免疫器官的表達(dá),用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)ALV-J感染雞的骨髓,胸腺,脾臟和法氏囊等免疫器官中chNHE1均有上調(diào),chNHE1在骨髓的髓系細(xì)胞系表現(xiàn)明顯。目前人類(lèi)醫(yī)學(xué)領(lǐng)域研究表明,NHE1對(duì)心肌缺血/再灌注,心肌損傷或心臟衰竭具有重要作用,諸多相關(guān)學(xué)者研究抑制NHE1制劑或者化學(xué)藥物從而減輕心肌損傷程度,保證人身安全,本研究也為此工作提供部分參考。再者ECL1是ALV-J受體的關(guān)鍵域,但是ALV-J受體是否還具有輔助受體或者其他輔助因子仍是在研究中。綜上所述,本研究表明Anti-ECL1抗體可在限定時(shí)間內(nèi)有效阻斷ALV-J的感染;Anti-ECL1對(duì)心肌和肝臟具有顯著的保護(hù)作用,但ECL1域不是ALV-J感染細(xì)胞的唯一結(jié)合部位;感染ALV-J雞chNHE1在免疫組織器官表達(dá)均有上調(diào),在骨髓髓系細(xì)胞表現(xiàn)明顯;chNHE1在ALV-J誘導(dǎo)的組織損傷中起決定作用;此發(fā)現(xiàn)為人類(lèi)醫(yī)學(xué)心肌損傷的所引起的各種疾病奠定一部分參考;亦為ALV-J及相關(guān)病毒的控制提供了新的思路與方法。
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：S855.3

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前8條

1 李娜;王銘潔;朱依純;;NHE1的結(jié)構(gòu)研究及其在缺血再灌注中的作用[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2011年06期

2 王s，

本文編號(hào)：1143348