本文關(guān)鍵詞：沼澤型水牛VASA基因啟動子的克隆及轉(zhuǎn)錄活性檢測

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【摘要】：【目的】克隆沼澤型水牛VASA基因5′側(cè)翼序列,對啟動子進行生物信息學分析及轉(zhuǎn)錄活性檢測,為后續(xù)水牛繁殖性能的分子機理研究奠定基礎(chǔ)�！痉椒ā扛鶕�(jù)GenBank已公布的河流型水牛(Bubalus bubalis)的VASA5′側(cè)翼序列,經(jīng)過同源比對,設(shè)計PCR引物。以沼澤型水牛血液基因組為模板擴增VASA基因5′側(cè)翼序列并進行測序和生物信息學分析。將擴增的VASA基因5′側(cè)翼片段插入pEGFP-1多克隆位點處,構(gòu)建pVASA-EGFP-1載體。載體經(jīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染HEK-293T和CHO細胞系,分析其轉(zhuǎn)錄活性�！窘Y(jié)果】成功克隆沼澤型水牛VASA 5′側(cè)翼序列及部分CDS區(qū)序列,共3 081bp,同源性分析表明,沼澤型水牛VASA基因5′側(cè)翼序列與河流型水牛、黃牛、綿羊、山羊、小鼠和人的相似性分別為99%,96%,93%,95%,90%和79%。對其5′側(cè)翼序列2 000bp進行啟動子預測及轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點預測,發(fā)現(xiàn)在其翻譯起始位點上游-635--586處存在TATA box,啟動子區(qū)存在Nobox、Stat1、Stat3、Stat4、Stat5a、Stat5b、Stat6、Gata3、Smad2、Smad3和Smad4等反式作用因子結(jié)合位點,其中Stat家族基因在VASA啟動子區(qū)存在多個結(jié)合位點,且同一位點又存在多個Stats基因結(jié)合的情況。水牛VASA啟動子能啟動EGFP在HEK-293T細胞中的表達,但非常微弱;能啟動EGFP在CHO細胞中表達,且啟動活性與CMV啟動子相似�！窘Y(jié)論】成功克隆了沼澤型水牛VASA基因啟動子,分析了其啟動子序列特征并成功驗證其組織特異性和轉(zhuǎn)錄活性。
【作者單位】： 中國農(nóng)業(yè)科學院廣西水牛研究所廣西水牛遺傳繁育重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： 沼澤型水牛 VASA基因 生物信息學分析 轉(zhuǎn)錄活性
【基金】：農(nóng)業(yè)部轉(zhuǎn)基因重點項目(2014ZX08010-012B) 廣西科技攻關(guān)國際交流與合作項目(桂科合14123001-5) 廣西水牛研究所基本業(yè)務(wù)費項目(水�；�160206)
【分類號】：S823.83;Q78
【正文快照】： 水牛具有適應(yīng)性強、耐高溫高濕、耐粗飼、抗病力強、使用年限長、靜默發(fā)情、繁殖力低和產(chǎn)奶量低等生物學特點,非常適合于我國南方地區(qū)養(yǎng)殖[1-2]。近年來,隨著生活水平的提高,人們對水牛肉和水牛奶的需求日益增加,但是水牛繁殖力低嚴重制約了該產(chǎn)業(yè)的發(fā)展,而造成這一現(xiàn)狀的主要，

本文編號：1136158