本文關(guān)鍵詞：綿羊肺炎支原體滅活疫苗的研制及免疫效果的評(píng)價(jià)

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【摘要】：綿羊肺炎支原體(Mycoplasma ovipneumoniae,MO)是感染綿羊或山羊的一種重要的致病性病原體,主要引起羊的間質(zhì)性肺炎。1963年首次從患間質(zhì)性肺炎的綿羊中分離得到該病原。國(guó)內(nèi)于1979年首次從患肺炎的綿羊肺臟中分離得到,此后在國(guó)內(nèi)逐步蔓延傳播,造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。為研發(fā)防控綿羊支原體肺炎的有效疫苗,在綜合前期分析研究的基礎(chǔ)上,本文對(duì)綿羊肺炎支原體滅活疫苗制備以及不同佐劑對(duì)綿羊肺炎支原體滅活疫苗免疫小鼠抗體水平比較、兩種疫苗免疫羔羊免疫效果評(píng)價(jià)及攻毒保護(hù)試驗(yàn)等疫苗研發(fā)關(guān)鍵技術(shù)進(jìn)行了試驗(yàn)研究,主要研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下:1.綿羊肺炎支原體滅活疫苗的研制及檢測(cè)應(yīng)用綿羊肺炎支原體新疆分離株MO-1411、MO-1421進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng),用膜分離設(shè)備對(duì)綿羊肺炎支原體培養(yǎng)物進(jìn)行濃縮,甲醛滅活獲得抗原,隨后應(yīng)用ISA 206雙相佐劑試制了綿羊肺炎支原體滅活油佐劑疫苗,經(jīng)無菌檢測(cè)、物理性狀檢測(cè)、穩(wěn)定性與保存期試驗(yàn)、動(dòng)物安全性試驗(yàn)等檢驗(yàn),結(jié)果表明疫苗物理性狀良好,置于4℃可保存180 d,接種試驗(yàn)動(dòng)物后未見異常反應(yīng),注射部位未見化膿及紅腫現(xiàn)象,表明疫苗安全可靠。本研究初步建立了MO滅活疫苗的制備工藝,為規(guī)�；a(chǎn)提供了一定的方法與技術(shù)支持。2.兩種進(jìn)口佐劑對(duì)綿羊肺炎支原體滅活疫苗免疫小鼠抗體水平的比較應(yīng)用ISA201與ISA206兩種進(jìn)口油佐劑分別制備綿羊肺炎支原體滅活疫苗,以不同劑量免疫健康成年小鼠,用MO正向間接血凝試劑盒測(cè)定第二次免疫后7、14、21、28d血清抗體效價(jià),結(jié)果顯示:ISA 206佐劑疫苗0.2 mL劑量組誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生的抗體時(shí)間最快抗體效價(jià)最高且維持時(shí)間長(zhǎng),均優(yōu)于其它三個(gè)劑量組,ISA 206佐劑疫苗0.2 mL劑量組14d抗體效價(jià)達(dá)1:128,28d開始下降。說明ISA 206佐劑優(yōu)于ISA201佐劑,可作為MO滅活疫苗的優(yōu)選佐劑。3.綿羊肺炎支原體滅活疫苗免疫羔羊的免疫保護(hù)性評(píng)價(jià)為研發(fā)用于預(yù)防綿羊支原體肺炎滅活油佐劑疫苗并評(píng)價(jià)其免疫效。隨機(jī)選取10-15日齡羔羊60只,分A、B、C三個(gè)免疫組,每組20只于10-15日齡首免,間隔14d進(jìn)行二免,A組肌肉注射泰豐生物公司生產(chǎn)疫苗3 mL/只,B組肌肉注射本實(shí)驗(yàn)室所研究疫苗3 mL/只;C組肌肉注射本實(shí)驗(yàn)室研究疫苗2mL/只。測(cè)定三組羔羊免疫后14、21、28、35、42d血清抗體效價(jià),并隨機(jī)選取相同日齡免疫與未免疫羔羊各3只進(jìn)行攻毒保護(hù)試驗(yàn),每只羔羊經(jīng)鼻腔黏膜接種(滴注)1 mL、氣管注射2mL MO培養(yǎng)物(8.5×107 CFU/mL),記錄羔羊體溫、體重,觀察臨床癥狀,檢測(cè)血清抗體水平。攻毒后28 d剖檢觀察肺臟臨床解剖學(xué)及病理組織學(xué)變化,并采集病變肺臟組織進(jìn)行MO分離培養(yǎng)。結(jié)果:A組免疫羔羊在免后28d血清MO抗體達(dá)到最高((5.8±1.31)log2),35d開始下降,3只攻毒羔羊均保持良好的精神狀態(tài)且體溫只是在攻毒前后波動(dòng)較大,但在正常范圍內(nèi),攻毒14d就能產(chǎn)生較高的抗體效價(jià)((4.33±0.57)log2),28d達(dá)到最高((6.33±1.52)log2),肺臟解剖學(xué)觀察有輕微變化,病理組織學(xué)觀察肺泡內(nèi)有淤血、支氣管周圍炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、肺間質(zhì)增寬,肺臟中未分離回收到MO;B組免疫羔羊在免疫后21 d血清MO抗體達(dá)到最高((5.7±1.49)log2)維持到35d,C組免疫羔羊在免疫后28 d血清MO抗體達(dá)到最高((6.7±0.95)log2),35d下降兩個(gè)梯度,3只攻毒羔羊均保持良好的精神狀態(tài)且體溫變化不明顯,攻毒14d就能產(chǎn)生較高的抗體效價(jià)((4.33±0.57)log2),28d達(dá)到最高((6.66±0.57)log2),肺臟解剖學(xué)觀察有輕微病變,病理組織學(xué)觀察、支氣管周圍有淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)、個(gè)別區(qū)域間質(zhì)增生,肺臟中未分離回收到MO;3只未免疫對(duì)照組羔在攻毒后出現(xiàn)體溫升高、輕度咳喘的癥狀,在21d抗體效價(jià)才達(dá)到((4.33±0.57)log2),28d達(dá)最高((5.33±0.57)log2),羔羊肺臟出現(xiàn)米粒大小及黃豆大小的白色結(jié)節(jié),肺門淋巴結(jié)腫大,個(gè)別區(qū)域出現(xiàn)肝變,與自然感染的病例相似,病理組織學(xué)觀察可見支氣管周圍淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)、肺間質(zhì)增寬、支氣管內(nèi)有淤血,支氣管上皮細(xì)胞脫落等病理變化,從兩只羔羊病變肺組織中分離回收到MO。結(jié)果表明:本研究制備的綿羊肺炎支原體滅活疫苗與泰豐生物技術(shù)有限公司所產(chǎn)綿羊支原體肺炎疫苗免疫羔羊后使機(jī)體產(chǎn)生的抗體水平差異不顯著,可用于綿羊支原體肺炎的預(yù)防,兩種疫苗都能起到誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生良好的免疫應(yīng)答反應(yīng),并能抵抗MO感染所致的肺臟病變作用。
【關(guān)鍵詞】：綿羊肺炎支原體 抗原濃縮 滅活疫苗 免疫抗體 免疫保護(hù)
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S858.26
【目錄】：

• 摘要6-8
• ABSTRACT8-12
• 符號(hào)說明12-13
• 引言13-14
• 第一章 文獻(xiàn)綜述 綿羊肺炎支原體、綿羊支原體肺炎疾病及綿羊肺炎支原體疫苗研究進(jìn)展14-26
• 1.綿羊肺炎支原體概述14-25
• 1.1 綿羊肺炎支原體病原學(xué)14-17
• 1.2 綿羊肺炎支原體流行病學(xué)17-18
• 1.3 綿羊支原體肺炎臨床癥狀及病理變化18-19
• 1.4 綿羊肺炎支原體致病機(jī)理19-20
• 1.5 綿羊肺炎支原體的檢測(cè)技術(shù)20-22
• 1.6 綿羊肺炎支原體病的治療及防制技術(shù)22-23
• 1.7 綿羊肺炎支原體誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)23
• 1.8 綿羊肺炎支原體疫苗研究進(jìn)展23-25
• 2.結(jié)語25-26
• 第二章 試驗(yàn)研究26-50
• 試驗(yàn)一 綿羊肺炎支原體滅活疫苗的研制及檢測(cè)26-33
• 1 材料27
• 1.1 菌株、培養(yǎng)基及相關(guān)試劑材料27
• 1.2 主要儀器設(shè)備27
• 2. 方法27-29
• 2.1 抗原的制備27
• 2.2 超濾濃縮法27-28
• 2.3 綿羊肺炎支原體抗原菌懸液滅活28
• 2.4 綿羊肺炎支原體支原體滅活疫苗的制備及檢測(cè)28-29
• 3 結(jié)果29-30
• 3.1 濃縮方法蛋白含量以及CFU計(jì)數(shù)結(jié)果29
• 3.2 膜分離設(shè)備消毒試驗(yàn)結(jié)果29
• 3.3 菌懸液滅活檢驗(yàn)29
• 3.4 疫苗無菌檢驗(yàn)29
• 3.5 動(dòng)物安全性試驗(yàn)結(jié)果29-30
• 3.6 物理性狀檢測(cè)結(jié)果30
• 3.7 穩(wěn)定性及保存期試驗(yàn)結(jié)果30
• 4 討論30-32
• 試驗(yàn)一結(jié)論32-33
• 試驗(yàn)二 兩種進(jìn)口佐劑對(duì)綿羊肺炎支原體滅活疫苗免疫小鼠抗體水平的比較33-39
• 1.材料與方法34
• 1.1 試驗(yàn)菌株34
• 1.2 培養(yǎng)基34
• 1.3 試驗(yàn)動(dòng)物34
• 1.4 佐劑及試劑盒34
• 1.5 主要儀器設(shè)備34
• 2 方法34-36
• 2.1 抗原制備34
• 2.2 綿羊肺炎支原體滅活疫苗的制備34-35
• 2.3 免疫方法及血樣的采集35
• 2.4 抗體水平檢測(cè)方法35-36
• 3 結(jié)果36-37
• 3.1 抗體水平檢測(cè)36-37
• 4 討論37-38
• 試驗(yàn)二結(jié)論38-39
• 試驗(yàn)三 綿羊肺炎支原體滅活疫苗的制備及羔羊免疫保護(hù)的初步評(píng)價(jià)39-50
• 1 材料和方法40-41
• 1.1 試驗(yàn)菌株、培養(yǎng)基及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物40
• 1.2 主要試劑及儀器設(shè)備40
• 1.3 菌液擴(kuò)大培養(yǎng)及濃縮40
• 1.4 綿羊肺炎支滅活疫苗的制備及檢測(cè)40-41
• 1.5 疫苗免疫程序及抗體檢測(cè)41
• 1.6 攻毒保護(hù)試驗(yàn)與評(píng)價(jià)指標(biāo)41
• 2 結(jié)果與分析41-46
• 2.1 免疫羔羊后抗體水平變化41-42
• 2.2 免疫后羊體重變化42-43
• 2.3 試驗(yàn)羔羊攻毒后抗體水平變化43
• 2.4 試驗(yàn)羔羊攻毒后體重變化43-44
• 2.5 攻毒后羊體溫變化曲線44
• 2.6 試驗(yàn)羔羊攻毒后臨床癥狀44
• 2.7 攻毒羔羊肺臟病理解剖學(xué)變化44
• 2.8 攻毒羔羊肺臟病理組織學(xué)變化44-46
• 2.9 攻毒羔羊肺組織中MO分離結(jié)果46
• 3 討論46-49
• 試驗(yàn)三結(jié)論49-50
• 全文結(jié)論及創(chuàng)新點(diǎn)50-51
• 參考文獻(xiàn)51-55
• 致謝55-56
• 作者簡(jiǎn)介56-57
• 導(dǎo)師評(píng)閱表57

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本文編號(hào)：1134945