發(fā)布時間：2017-11-03 03:19

  本文關(guān)鍵詞：不同濃度α-促黑素細胞激素對綿羊黑素細胞增殖和黑素生成的研究

  更多相關(guān)文章： 黑色素細胞 α-促黑素細胞激素(α-MSH) 黑素皮質(zhì)素受體1(MC1R) cAMP路徑 黑色索

【摘要】：α-MSH是一種重要的肽類激素,與MC1R結(jié)合通過cAMP信號通路影響黑色素的生成。本試驗通過在體外培養(yǎng)的綿羊皮膚黑素細胞中添加不同濃度a-MSH,研究其對黑色素生成基因(MC1R、MITF、TYR)的表達、cAMP、cGMP含量和黑色素合成的影響,以揭示α-MSH在黑色素合成中的作用機制。本試驗在傳代培養(yǎng)的第七代綿羊皮膚黑素細胞培養(yǎng)基中添加不同濃度(0、0.1、1、10、100、1000 nmol/L) α-MSH,培養(yǎng)72 h,主要實驗結(jié)果如下：1與對照組相比,實驗組細胞數(shù)量呈現(xiàn)明顯的變化趨勢,添加0.1-10 nmol/L使細胞數(shù)量呈上升趨勢,100-1000 nmol/L使細胞數(shù)量下降,細胞呈現(xiàn)明顯的樹突狀。2 qRT-PCR技術(shù)檢測基因mRNA表達差異,結(jié)果表明：添加10 nmol/L時,基因表達水平最高,MC1R、MITF和TYR基因表達量分別是對照組的1.878倍(P0.05)、3.116倍(P0.01)、3.602倍(P0.01)。隨著濃度的增高,基因的表達量呈下降趨勢,但仍高于對照組。3 Western Blot檢測蛋白表達差異,結(jié)果表明：MC1R、MITF、TYR和TYRP2蛋白表達量呈先升高后降低的趨勢,添加10 nmol/L時,MC1R、MITF、TYR和TYRP2蛋白表達量最高,分別是對照組的1.687倍、1.514倍、1.386倍、1.265倍,均差異極顯著(P0.01)。4 ELISA方法檢測細胞內(nèi)cAMP和cGMP含量的變化情況,結(jié)果顯示：隨著添加濃度的增高,cAMP的產(chǎn)量總體增加,cGMP的產(chǎn)量總體降低。添加10 nmol/L時,cAMP的產(chǎn)量增加最多,是對照組的1.372倍(P0.01), cGMP的產(chǎn)量降低最多,是對照組的0.464倍(P0.01)。5酶標法檢測黑色素產(chǎn)量變化,結(jié)果發(fā)現(xiàn)：不同濃度α-MSH均促進黑色素合成。在10 nmol/L,黑色素合成增加最多,是對照組的2.551倍(P0.01),之后有所降低。由此得出結(jié)論：不同濃度α-MSH能促進綿羊皮膚黑素細胞數(shù)量增加、樹突增長,黑色素生成增多,α-MSH通過調(diào)控黑色素形成的cAMP路徑,影響MC1R、MITF和TYR基因的表達,從而影響黑色素的合成,但添加10 nmol/L α-MSH時,對黑色素細胞的表型及黑色素含量影響最為顯著。
【關(guān)鍵詞】：黑色素細胞 α-促黑素細胞激素(α-MSH) 黑素皮質(zhì)素受體1(MC1R) cAMP路徑 黑色索
【學(xué)位授予單位】：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S826
【目錄】：

• 摘要8-9
• 前言9-10
• 文獻綜述10-19
• 1 黑色素細胞及其調(diào)節(jié)機制10-13
• 1.1 黑色素細胞的發(fā)育10
• 1.2 黑色素的生成10-12
• 1.3 黑色素生成相關(guān)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路12-13
• 1.3.1 cAMP/PKA信號通路12
• 1.3.2 NO/cGMP/PKG信號通路12
• 1.3.3 DAG/PKC信號通路12-13
• 1.3.4 MAPK級聯(lián)途徑13
• 2 黑色素生成相關(guān)基因的研究13-16
• 2.1 黑素皮質(zhì)素受體113-15
• 2.2 小眼畸形相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子15
• 2.3 酪氨酸酶15-16
• 3 α-促黑素細胞激素與黑色素生成16-17
• 3.1 α-MSH的分子結(jié)構(gòu)及來源16
• 3.2 α-MSH調(diào)控黑色素合成的機理16-17
• 3.3 α-MSH的研究進展17
• 4 研究目的和意義17-19
• 材料和方法19-33
• 1 綿羊黑色素細胞培養(yǎng)19-21
• 1.1 實驗材料19-20
• 1.1.1 實驗樣本19
• 1.1.2 實驗儀器19
• 1.1.3 主要試劑和耗材19
• 1.1.4 主要溶液的配制19-20
• 1.2 實驗方法20-21
• 1.2.1 綿羊黑色素細胞復(fù)蘇20
• 1.2.2 綿羊黑色素細胞傳代20
• 1.2.3 綿羊黑色素細胞凍存20-21
• 2 細胞總RNA提取和qRT-PCR21-25
• 2.1 實驗材料21-22
• 2.1.1 實驗樣本21
• 2.1.2 主要儀器21
• 2.1.3 主要試劑和耗材21-22
• 2.1.4 主要溶液的配制22
• 2.2 實驗方法22-25
• 2.2.1 綿羊黑色素細胞總RNA的提取22-23
• 2.2.2 cDNA的合成23
• 2.2.3 引物設(shè)計23-24
• 2.2.4 熒光定量PCR反應(yīng)體系及程序24-25
• 2.2.5 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計分析25
• 3 Western Blot檢測蛋白表達差異25-29
• 3.1 實驗材料25-26
• 3.1.1 實驗樣本25
• 3.1.2 主要儀器25
• 3.1.3 主要試劑和耗材25-26
• 3.1.4 主要溶液的配制26
• 3.2 實驗方法26-29
• 3.2.1 綿羊黑色素細胞總蛋白的提取26-27
• 3.2.2 考馬斯亮藍染色液檢測總蛋白27-28
• 3.2.3 SDS-PAGE電泳28
• 3.2.4 轉(zhuǎn)膜28
• 3.2.5 免疫反應(yīng)28-29
• 3.2.6 化學(xué)發(fā)光29
• 3.2.7 凝膠圖像分析29
• 4 黑色素細胞中cAMP和cGMP含量的測定29-31
• 4.1 實驗材料29-30
• 4.1.1 實驗樣本29
• 4.1.2 主要儀器29
• 4.1.3 主要試劑和耗材29
• 4.1.4 主要溶液的配制29-30
• 4.2 實驗方法30-31
• 4.2.1 ELISA試劑盒檢測cAMP和cGMP含量30-31
• 5 黑色素的提取和含量的測定31-33
• 5.1 實驗材料31
• 5.1.1 實驗樣本31
• 5.1.2 主要儀器31
• 5.1.3 主要試劑和耗材31
• 5.1.4 主要溶液的配制31
• 5.2 實驗方法31-33
• 5.2.1 黑色素的提取和含量測定31-33
• 試驗結(jié)果33-46
• 1 不同濃度α-MSH對綿羊皮膚黑色素細胞形態(tài)學(xué)影響33-34
• 2 不同濃度α-MSH對MC1R、MITF、TYR基因mRNA表達差異34-38
• 2.1 總RNA質(zhì)量鑒定34
• 2.2 qRT-PCR實驗結(jié)果34-36
• 2.3 不同濃度α-MSH對MC1R、MITF、TYR基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達差異.36-38
• 3 不同濃度α-MSH對MC1R、MITF、TYR和TYRP2蛋白水平表達差異38-42
• 4 不同濃度α-MSH對黑色素細胞內(nèi)cAMP和cGMP含量影響42-44
• 5 不同濃度α-MSH對黑色素細胞中黑色素含量的影響44-46
• 討論46-50
• 1 不同濃度α-MSH對綿羊黑色素細胞增殖的影響46-47
• 2 不同濃度α-MSH對綿羊黑色素合成的影響47-50
• 2.1 不同濃度α-MSH對綿羊黑色素生成相關(guān)基因和蛋白影響47-48
• 2.2 不同濃度α-MSH對cAMP和cGMP影響48
• 2.3 不同濃度α-MSH對黑色素生成的影響48-50
• 結(jié)論50-51
• 參考文獻51-58
• Abstract58-60
• 致謝60

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1 馬長俊,劉子s，

本文編號：1134418