發(fā)布時(shí)間：2017-11-02 13:06

  本文關(guān)鍵詞：uPA對(duì)體外培養(yǎng)牛卵丘顆粒細(xì)胞增殖與凋亡的影響

  更多相關(guān)文章： 牛卵丘顆粒細(xì)胞 尿激酶型纖溶酶原激活劑 尿激酶型纖溶酶原激活劑受體 增殖 凋亡

【摘要】：尿激酶型纖溶酶激活劑與其受體(uPA/uPAR系統(tǒng))在正常組織或細(xì)胞生理與生殖活動(dòng)中具有重要作用。但是uPAR在牛卵泡細(xì)胞中的表達(dá)以及uPA在牛卵丘-卵母細(xì)胞復(fù)合體(cumulus-oocyte complex, COCs)成熟過程中表達(dá)的意義和作用尚少見報(bào)道。本研究利用免疫細(xì)胞熒光化學(xué)、細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞增殖/凋亡/細(xì)胞周期檢測(cè)等多種技術(shù),探討了uPA和uPAR在卵丘顆粒細(xì)胞上表達(dá)情況以及兩者在調(diào)節(jié)體外培養(yǎng)的牛卵丘顆粒細(xì)胞增殖與凋亡過程中可能的互作機(jī)制。結(jié)果顯示,①uPA和uPAR蛋白在牛卵丘顆粒細(xì)胞上都有表達(dá)；② 0.5 ng/mL uPA和1μg/mL Amiloride(uPA活性抑制劑)能分別顯著增加或者抑制細(xì)胞增殖；③在培養(yǎng)48 h和72 h,uPA能顯著促進(jìn)細(xì)胞增殖,同時(shí)uPAR抗體添加顯著阻斷了uPA對(duì)牛卵丘顆粒細(xì)胞增殖的促進(jìn)作用；④Amiloride與uPAR抗體能顯著增加處于S和G2/M期的細(xì)胞比率,且對(duì)細(xì)胞凋亡沒有影響。本研究推測(cè),體外培養(yǎng)的牛卵丘顆粒細(xì)胞可能通過自分泌途徑,實(shí)現(xiàn)uPA與錨定于自身細(xì)胞膜外的uPAR結(jié)合,進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞的增殖。uPA活性或者uPAR功能被阻斷后,卵丘顆粒細(xì)胞增殖被抑制,其原因可能在于細(xì)胞被阻斷在G2-M或者中-后期檢驗(yàn)點(diǎn),而與細(xì)胞凋亡無關(guān)。本研究結(jié)果對(duì)于進(jìn)一步深入理解牛卵泡發(fā)育與閉鎖機(jī)制有重要意義。
【關(guān)鍵詞】：牛卵丘顆粒細(xì)胞 尿激酶型纖溶酶原激活劑 尿激酶型纖溶酶原激活劑受體 增殖 凋亡
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S823
【目錄】：

• 摘要4-5
• abstract5-10
• 縮略語表10-11
• 1 引言11-20
• 1.1 卵丘細(xì)胞的形成11
• 1.2 卵丘細(xì)胞對(duì)于卵母細(xì)胞的發(fā)育與成熟的功能11-12
• 1.3 uPA/uPAR系統(tǒng)的概述12-14
• 1.3.1 尿激酶型纖溶酶原激活劑(uPA)的功能12
• 1.3.2 尿激酶型纖溶酶原激活劑(uPA)結(jié)構(gòu)12-13
• 1.3.3 尿激酶纖維蛋白溶酶原激活物受體(uPAR)功能13
• 1.3.4 尿激酶纖維蛋白溶酶原激活物受體(uPAR)的結(jié)構(gòu)13-14
• 1.3.5 uPA/uPAR系統(tǒng)的研究進(jìn)展14
• 1.4 卵丘細(xì)胞增殖與卵泡成熟的關(guān)系14-17
• 1.4.1 原始卵泡14
• 1.4.2 生長(zhǎng)卵泡14-16
• 1.4.3 成熟卵泡16
• 1.4.4 卵丘細(xì)胞對(duì)卵母細(xì)胞成熟的作用及影響16-17
• 1.5 uPA/uPAR系統(tǒng)與卵丘的關(guān)系17-18
• 1.6 細(xì)胞的周期和凋亡18-19
• 1.7 研究目的及意義19-20
• 2 實(shí)驗(yàn)材料與方法20-29
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料20-21
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器20
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑20
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)材料20-21
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法21-29
• 2.2.1 帶有片層狀壁顆粒細(xì)胞的卵丘-卵母復(fù)合體的獲得21
• 2.2.2 卵丘顆粒細(xì)胞的收集和體外培養(yǎng)21
• 2.2.3 免疫熒光染色21-23
• 2.2.4 uPA、Amiloride和uPAR ant ibody在細(xì)胞培養(yǎng)中的增殖影23-25
• 2.2.5 檢測(cè)uPA、Amiloride和uPAR antibody對(duì)細(xì)胞周期的影響25
• 2.2.6 檢測(cè)uPA、Amiloride和uPAR antibody對(duì)細(xì)胞凋亡的影響25-29
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析29-38
• 3.1 細(xì)胞的培養(yǎng)29
• 3.2 牛卵丘顆粒細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線29-30
• 3.3 uPA和uPAR蛋白在培養(yǎng)牛卵丘顆粒細(xì)胞中的表達(dá)30-31
• 3.4 uPA和Amiloride對(duì)培養(yǎng)卵丘顆粒細(xì)胞增殖的影響31-33
• 3.4.1 uPA對(duì)牛卵丘顆粒細(xì)胞增殖的影響31
• 3.4.2 Amiloride對(duì)牛卵丘顆粒細(xì)胞增殖的影響31-32
• 3.4.3 uPA與Amiloride聯(lián)合添加對(duì)牛卵丘顆粒細(xì)胞增殖的影響32-33
• 3.4.4 uPA與uPAR抗體聯(lián)合添加對(duì)牛卵丘顆粒細(xì)胞增殖的影響33
• 3.5 uPA、Amiloride和uPAR antibody對(duì)細(xì)胞周期的影響33-35
• 3.6 uPA、Amiloride和uPAR antibody對(duì)牛卵丘顆粒細(xì)胞凋亡的影響35-38
• 3.6.1 uPA和Amiloride對(duì)牛卵丘顆粒細(xì)胞凋亡的影響35-36
• 3.6.2 uPA和uPAR antibody對(duì)牛卵丘顆粒細(xì)胞凋亡的影響36-38
• 4 實(shí)驗(yàn)討論38-41
• 4.1 牛卵丘顆粒細(xì)胞體外培養(yǎng)的一般特征38
• 4.2 uPA與uPAR在卵丘顆粒細(xì)胞上的表達(dá)情況38-39
• 4.3 uPA和Amiloride對(duì)卵丘顆粒細(xì)胞增殖的影響39
• 4.4 uPA和uPAR antibody對(duì)卵丘顆粒細(xì)胞的增殖影響39-40
• 4.5 uPA、Amiloride和uPAR antibody對(duì)細(xì)胞周期的影響40
• 4.6 uPA、Amiloride和uPAR antibody對(duì)細(xì)胞凋亡的影響40-41
• 5 結(jié)論41-42
• 致謝42-43
• 參考文獻(xiàn)43-48
• 作者簡(jiǎn)介48

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