本文關(guān)鍵詞：抗狂犬病病毒單克隆抗體的制備及雙抗夾心ELISA檢測(cè)方法的建立

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【摘要】：狂犬病是由狂犬病病毒(RABV)引起的一種古老的、感染中樞神經(jīng)系統(tǒng)的急性接觸性人獸共患傳染病。近年來(lái),我國(guó)年均報(bào)告的人狂犬病死亡人數(shù)仍處高位,特別是動(dòng)物狂犬病仍呈上升趨勢(shì),而目前狂犬病病毒檢測(cè)方法依然存在諸多不足,因此建立簡(jiǎn)單快捷、準(zhǔn)確特異的狂犬病病毒檢測(cè)方法十分必要。本研究以純化的人用狂犬病疫苗毒作為免疫原,通過(guò)足墊對(duì)6-8周齡的雌性BALB/C小鼠進(jìn)行免疫,將抗體水平達(dá)到融合要求的小鼠脾細(xì)胞與鼠骨髓瘤細(xì)胞(sp2/0)在PEG作用下進(jìn)行細(xì)胞融合,通過(guò)有限稀釋法克隆化培養(yǎng)及蛋白免疫印跡、間接免疫熒光試驗(yàn)篩選出3株(1G9,1E6,3F3)能穩(wěn)定分泌抗狂犬病病毒核蛋白的雜交瘤細(xì)胞株,所分泌的抗體亞類都為Ig G2b。用辛酸-硫酸銨法對(duì)所收集到腹水進(jìn)行純化,純化后3F3的抗體效價(jià)為1.6×104以上。以純化抗體3F3作為一抗,通過(guò)間接免疫熒光對(duì)腦組織樣品檢測(cè),檢測(cè)發(fā)現(xiàn),其靈敏度和特異性良好。對(duì)純化單抗進(jìn)行辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記,應(yīng)用免疫酶染色對(duì)病毒感染細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè),發(fā)現(xiàn)其特異性、靈敏度好。建立了多克隆抗體-待檢抗原-酶標(biāo)單抗的雙抗夾心ELISA檢測(cè)RABV方法,并對(duì)檢測(cè)條件進(jìn)行了優(yōu)化�？箍袢〔《径嗫沟淖罴寻粷舛葹�1:100倍,酶標(biāo)單抗的最佳稀釋濃度為1:1000倍,小牛血清的最佳封閉濃度是10%,最佳封閉時(shí)間是2 h,抗原最佳孵育時(shí)間為1 h,酶標(biāo)抗體孵育時(shí)間是1 h,底物顯色時(shí)間是10 min。用已標(biāo)定效價(jià)的狂犬疫苗作為標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,y=1.7012x-0.3596,相關(guān)系數(shù)為R2=0.9882。對(duì)10份細(xì)胞培養(yǎng)物樣品進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果發(fā)現(xiàn)這10份樣品的效價(jià)與國(guó)外抗狂犬病病毒核蛋白抗體檢測(cè)結(jié)果間無(wú)顯著差異(P=0.935,P0.05)。對(duì)犬瘟熱病毒(CDV),犬細(xì)小病毒(CPV)等進(jìn)行檢測(cè),發(fā)現(xiàn)本研究所建立的方法具有特異性。
【關(guān)鍵詞】：狂犬病病毒 核蛋白 單克隆抗體 雙抗夾心ELISA
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S852.65
【目錄】：

• 中文摘要5-6
• Abstract6-9
• 英文縮寫(xiě)詞表9-10
• 引言10-11
• 第一篇 文獻(xiàn)綜述11-21
• 第1章 狂犬病病毒研究進(jìn)展11-16
• 1.1 狂犬病毒的生物學(xué)特征11-12
• 1.2 狂犬病的流行病學(xué)12-13
• 1.3 狂犬病的主要蛋白研究進(jìn)展13-16
• 第2章 單克隆抗體的研究進(jìn)展及應(yīng)用16-19
• 2.1 單克隆抗體現(xiàn)狀16
• 2.2 基因工程抗體16-18
• 2.3 單克隆抗體的應(yīng)用18-19
• 第3章 狂犬病抗原檢測(cè)方法的研究進(jìn)展19-21
• 3.1 傳統(tǒng)檢測(cè)方法19
• 3.2 其它新型的檢測(cè)方法19-21
• 第二篇 研究?jī)?nèi)容21-53
• 第1章 單克隆抗體的制備及鑒定21-42
• 1.1 材料21-22
• 1.2 方法22-31
• 1.3 結(jié)果31-39
• 1.4 討論39-41
• 1.5 小結(jié)41-42
• 第2章 雙抗夾心ELISA方法的建立42-53
• 2.1 材料42
• 2.2 方法42-45
• 2.3 結(jié)果45-51
• 2.4 討論51-52
• 2.5 小結(jié)52-53
• 結(jié)論53-54
• 參考文獻(xiàn)54-63
• 導(dǎo)師簡(jiǎn)介63-64
• 作者簡(jiǎn)介64-65
• 致謝65

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 呂新軍;申辛欣;于鵬程;李浩;王力華;唐青;梁國(guó)棟;;狂犬病病毒CVS-11核蛋白B細(xì)胞線性抗原表位研究[J];病毒學(xué)報(bào);2014年03期

2 董關(guān)木,鄭海發(fā),劉增順,曲小肅,劉景華,吳小紅;我國(guó)純化狂犬病疫苗的臨床反應(yīng)及效果評(píng)價(jià)[J];中國(guó)生物制品學(xué)雜志;2002年05期

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本文編號(hào)：1119783