本文關(guān)鍵詞：廣西PRRSV地方流行毒株分子流行病學(xué)調(diào)查及不同豬群中PRRSV抗體檢測(cè)分析

  更多相關(guān)文章： 豬繁殖與呼吸綜合征病毒 分子流行病學(xué) 序列分析 抗體檢測(cè)

【摘要】：豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)作為一種高度接觸性傳染病,其病毒高度的變異是豬繁殖與呼吸綜合征免疫防控失敗的主要制約因素。結(jié)構(gòu)蛋白ORF5和非結(jié)構(gòu)蛋白Nsp2基因是進(jìn)行PRRSV分子流行病學(xué)研究和病毒遺傳變異分析的靶基因,對(duì)研究藍(lán)耳病毒的ORF5和Nsp2基因有著十分重要的意義。本研究對(duì)2012-2015年問(wèn)送檢的樣品進(jìn)行檢測(cè)分析,通過(guò)對(duì)ORF5和Nsp2基因序列測(cè)定和分析,以及不同豬群中PRRSV抗體水平檢測(cè)分析,進(jìn)一步了解廣西近年來(lái)PRRSV的流行趨勢(shì)及變異情況,為該病的綜合防控提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和理論依據(jù)。(1)本研究通過(guò)RT-PCR方法,對(duì)疑似感染PRRSV樣品進(jìn)行病原檢查分析,共檢測(cè)到91份陽(yáng)性樣品,陽(yáng)性率為18.13%。對(duì)所獲陽(yáng)性樣品進(jìn)行PRRSV特異性片段擴(kuò)增,獲得18條Nsp2基因序列和48條ORF5基因序列。Nsp2基因序列分析結(jié)果顯示：18個(gè)Nsp2基因與NCBI所收錄的部分參考毒株相應(yīng)核苷酸序列及其推導(dǎo)氨基酸同源性為51.9～99.1%和30.4～98.7%。所獲Nsp2推導(dǎo)氨基酸與JXA1株的同源性最高。48個(gè)ORF5基因NCBI部分參考毒株相應(yīng)核苷酸及推導(dǎo)氨基酸的同源性為61.8～99.7%和52.7-99.0%。以O(shè)RF5基因?yàn)橹?結(jié)合Nsp2基因進(jìn)行遺傳進(jìn)化分析,結(jié)果表明廣西流行的PRRSV毒株分屬于美洲型的2個(gè)亞群,主要是以JXA1為代表的Ⅳ亞群以及少數(shù)以HB-1(sh)/2002株為代表的Ⅲ亞群。氨基酸序列分些結(jié)果表明,所獲得的18個(gè)Nsp2基因中有15個(gè)存在與JXA1株一樣位置的30個(gè)不連續(xù)氨基酸的缺失。與VR-2332毒株相比,ORF5編碼的GP5蛋白中出現(xiàn)大量氨基酸的突變,特別是在B細(xì)胞表位的中和抗原表位(PNE)、T細(xì)胞表位以及潛在糖基化位點(diǎn)。與廣西過(guò)去10年NCBI所收錄部分參考毒株(89株)相比,自2012年以來(lái),氨基酸位點(diǎn)突變率明顯提高,主要集中在氨基酸位點(diǎn)R151K(18/48,突變率37.5%)；E170Q(14/48,突變率29.17%)；V185A(48/48,突變率100%)；Q196R/L(33/48,突變率68.75%)。而與之相比,參考毒株89株中發(fā)生突變的氨基酸R151→K151(2/89,突變率為2.24%)；E170Q(9/89,突變率10.11%)；V185A(63/89,突變率70.78%)；Q196R/L(7/89,突變率7.86%)。推測(cè)這些位點(diǎn)的突變將是今后廣西流行毒株突變的一個(gè)趨勢(shì)。且這些突變導(dǎo)致的蛋白內(nèi)在結(jié)構(gòu)變化、糖基位點(diǎn)的缺失可能會(huì)影響中和抗體產(chǎn)生的速度與數(shù)量。結(jié)合進(jìn)化樹(shù)分析結(jié)果,親緣關(guān)系與NCDA30毒株最近的三個(gè)毒株GXBS120815. GXYL130617. GXYL 130624氨基酸位點(diǎn)151、170、189、191、192等突變方向與NADC30株的突變方向一致,表明廣西存在NADC30-like毒株流行,推測(cè)可能與NADC30株來(lái)源于同一株,且特定位點(diǎn)突變方向可以作為參考毒株是否與NCDA30毒株源于同一毒株的參考性指標(biāo)。(2)為研究免疫壓力下PRRSV免疫情況,對(duì)廣西某地區(qū)2014-201 5年春秋兩季在養(yǎng)殖場(chǎng)、散養(yǎng)戶、屠宰場(chǎng)等采集的2228份血清進(jìn)行PRRSV抗體及部分樣品病原檢測(cè)。依據(jù)豬群養(yǎng)殖規(guī)模及來(lái)源分類,本研究獲得PRRSV抗體陽(yáng)性樣品為1698份,陽(yáng)性率為76.21%,S/P值2.5的比例占8.66%；規(guī)模種豬場(chǎng)及500頭以上的規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng),陽(yáng)性率最高達(dá)92.5%,S/P值2.5的最低比例為2.03%。散養(yǎng)戶抗體合格率最低,陽(yáng)性率為51-31-68.42%,免疫效果最差,S/P值2.5的比例高達(dá)16.28%。研究表明某地區(qū)種豬場(chǎng)及中大型規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)豬群比較穩(wěn)定,免疫效果最好,而散養(yǎng)戶豬群免疫效果最差且不穩(wěn)定,存在野毒感染的風(fēng)險(xiǎn)。依據(jù)豬群年齡、性別、用途分類,采集2228份的血清進(jìn)行PRRSV抗體,結(jié)果獲得PRRSV抗體陽(yáng)性樣品為1648份,陽(yáng)性率為73.97%,S/P值2.5比例為8.59%。豬群公豬的免疫效果最好,陽(yáng)性率83.33-94.44%,S/P值在1.38～1.44,S/P位2.5最高比例2.32%。保育豬抗體陽(yáng)性率為66.07-70.05%,S/P值2.5比例最低為13.53%。數(shù)據(jù)分析表明種豬群處于最穩(wěn)定狀態(tài),不同群體之間抗體水平參差不齊,整體豬群雖較為穩(wěn)定,但野毒感染風(fēng)險(xiǎn)較大。分析不同疫苗廠家免疫PRRSV抗體情況表明,不同廠家疫苗免疫效果差異顯著,2014～2015年政府采購(gòu)疫苗抗體陽(yáng)性率分別為71.81～82.32%,73.15～88.55%,總陽(yáng)性率為79.27%。非政府采購(gòu)疫苗抗體陽(yáng)性率分別為79.22%～89.91%,83.11～91.60%,總陽(yáng)性率為83.17%。2014～2015年弱毒疫苗抗體陽(yáng)性率85.4%,87.23%,滅活苗抗體陽(yáng)性率73.33%,76.68%,PRRS弱毒疫苗免疫效果要優(yōu)于滅活疫苗。此外,對(duì)廣西某地區(qū)送檢的55份樣品中,獲得11條ORF5基因序列,序列同源性及遺傳進(jìn)化分析表明,11株均為美洲型毒株,與JXA1株同源性最高,提示某地區(qū)主要以JXA1株為代表的高致病性藍(lán)耳病的Ⅳ亞群,及僅少數(shù)分布于HB-1(sh)/2002為代表的Ⅲ亞群在流行,與整個(gè)廣西地區(qū)流行的PRRS趨勢(shì)一致。
【關(guān)鍵詞】：豬繁殖與呼吸綜合征病毒 分子流行病學(xué) 序列分析 抗體檢測(cè)
【學(xué)位授予單位】：廣西大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S858.28
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-11
• 縮略詞表11-15
• 第一章 綜述15-31
• 1.1 豬繁殖與呼吸綜合征簡(jiǎn)介15
• 1.2 PRRSV的病原學(xué)研究15-17
• 1.2.1 病毒屬性15-16
• 1.2.2 病毒生物學(xué)特性16-17
• 1.3 PRRSV基因結(jié)構(gòu)17-23
• 1.3.1 基因組結(jié)構(gòu)17-19
• 1.3.2 各基因組編碼的蛋白及功能19-23
• 1.4 我國(guó)PRRS流行情況23-24
• 1.5 基因的多樣性和變異性24-26
• 1.6 PRRS抗體的概述26-28
• 1.6.1 天然免疫26
• 1.6.2 體液免疫26-27
• 1.6.3 細(xì)胞免疫27-28
• 1.7 PRRSV診斷方法28-29
• 1.7.1 血清學(xué)診斷方法28-29
• 1.7.2 分子生物學(xué)診斷方法29
• 1.8 研究目的和意義29-30
• 1.9 技術(shù)路線30-31
• 第二章 2012～2015年廣西地區(qū)PRRSV分子流行病學(xué)調(diào)查31-86
• 2.1 材料31-35
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)主要儀器設(shè)備31
• 2.1.2 主要試劑及菌株31
• 2.1.3 常用試劑的配制31-32
• 2.1.4 引物設(shè)計(jì)32-33
• 2.1.5 生物學(xué)軟件33
• 2.1.6 國(guó)內(nèi)外參考序列33-35
• 2.2 方法35-40
• 2.2.1 病料等樣品處理35-36
• 2.2.2 病毒RNA的提取36
• 2.2.3 PRRSV RT-PCR的檢測(cè)36-37
• 2.2.4 Nsp2基因及ORF5基因擴(kuò)增、測(cè)序與分析37-40
• 2.3 結(jié)果與分析40-81
• 2.3.1 PRRSV流行毒株RT-PCR檢測(cè)結(jié)果40-42
• 2.3.2 PRRSV特異片段Nsp2及ORF5基因的擴(kuò)增結(jié)果42-43
• 2.3.3 流行毒株Nsp2基因序列分析43-49
• 2.3.4 流行毒株ORF5基因序列分析49-64
• 2.3.5 本研究流行毒株與廣西2004～2015年部分毒株對(duì)比分析64-81
• 2.4 討論與分析81-86
• 2.4.1 廣西PRRSV的流行情況81
• 2.4.2 Nsp2基因變異分析81-82
• 2.4.3 ORF5基因變異分析82-86
• 第三章 豬群中PRRSV抗體檢測(cè)分析86-103
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料86-87
• 3.1.1 主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備86
• 3.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑86
• 3.1.3 豬群的選定86-87
• 3.1.4 生物學(xué)軟件87
• 3.1.5 引物設(shè)計(jì)87
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法87-88
• 3.2.1 血清樣品及組織病料的采集87
• 3.2.2 豬群血清PRRSV抗體檢測(cè)87
• 3.2.3 病料樣品處理87-88
• 3.2.4 樣品病毒RNA的提取88
• 3.2.5 PRRSV RT-PCR的檢測(cè)88
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果88-99
• 3.3.1 豬群血清PRRSV抗體檢測(cè)結(jié)果分析88-93
• 3.3.2 不同疫苗廠家豬群血清PRRSV抗體檢測(cè)結(jié)果分析93-95
• 3.3.3 血清及病料樣品的RT-PCR檢測(cè)95-96
• 3.3.4 ORF5基因的擴(kuò)增96
• 3.3.5 ORF5基因序列分析96-99
• 3.4 討論與分析99-103
• 3.4.1 不同豬群中抗體水平分析99-100
• 3.4.2 不同疫苗廠家所產(chǎn)生抗體水平分析100-101
• 3.4.3 豬群中分子病原學(xué)分析101
• 3.4.4 PRRS防控101-103
• 第四章 全文結(jié)論103-104
• 參考文獻(xiàn)104-116
• 致謝116-117
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文情況117

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 黃運(yùn)茂;蘇記良;于迎春;李孝偉;施振旦;;利用羊抗雞抗體檢測(cè)鵝血漿中的抗體水平[J];華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2007年02期

2 曹凱云;;生豬抗體檢測(cè),何時(shí)能為豬場(chǎng)保駕護(hù)航?[J];北方牧業(yè);2011年12期

3 顏立成,許進(jìn)香;間接酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法的第二抗體取代試驗(yàn)[J];獸醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);1984年02期

4 田克恭,王樹(shù)勤,孫巖松,彭傳貴;某獼猴繁育場(chǎng)B病毒相關(guān)抗體檢測(cè)報(bào)告[J];中國(guó)獸醫(yī)雜志;1993年01期

5 許文珍;王銳麗;周世應(yīng);;鵪鶉新域疫抗體消長(zhǎng)測(cè)定[J];云南畜牧獸醫(yī);1989年03期

6 劉堯服;徐蘭芳;曾志明;楊亮;陳宙;尹政;;玻板血凝和血凝抑制試驗(yàn)在雞新城疫病毒鑒定和抗體檢測(cè)中的應(yīng)用[J];江西畜牧獸醫(yī)雜志;1985年03期

7 王連想;任裕其;盧洪芬;閆曉菊;梁紅梅;孫彥偉;;廣東省豬繁殖與呼吸綜合征抗體十年檢測(cè)結(jié)果分析[J];廣東畜牧獸醫(yī)科技;2007年02期

8 吳惠英,賀爭(zhēng)鳴,衛(wèi)禮,王秀清,雷培琪;對(duì)實(shí)驗(yàn)鼠群LCM抗體檢測(cè)方法研究[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào);1989年S1期

9 金顏輝;夏曉紅;楊佳;吳波平;許先明;林芬;黃雁;;二種狂犬病抗體檢測(cè)方法的應(yīng)用比較[J];福建畜牧獸醫(yī);2011年05期

10 田克恭,遇秀玲,藺會(huì)云,韋毅,饒軍,華吳娜;B病毒抗原片在獼猴B病毒抗體檢測(cè)中的應(yīng)用[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)雜志;2002年02期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 全慧芬;;愛(ài)滋病流行狀況及孕產(chǎn)婦免費(fèi)病毒抗體檢測(cè)宣教[A];中國(guó)水利電力醫(yī)學(xué)科學(xué)技術(shù)學(xué)會(huì)臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)委員會(huì)外科專業(yè)、護(hù)理專業(yè)2007年會(huì)論文匯編[C];2007年

2 虞偉;張瑾;顧晨曦;賈麗;李曉軍;武建國(guó);;三種不同固相化方法用于抗CCP抗體的測(cè)定研究與結(jié)果評(píng)價(jià)[A];第六屆全國(guó)免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2008年

3 張申英;張欣欣;劉晶;盧敏;汪垣;;重組丙型肝炎病毒包膜蛋白2抗體檢測(cè)及其臨床意義[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)感染病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2001年

4 孫建新;吉旭陽(yáng);畢曉郁;;丙肝病毒單片段抗體檢測(cè)分析[A];第十屆全軍檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2005年

5 劉帥;王貝貝;崔麗麗;靳興軍;張躍;汪明;;幾種弓形蟲(chóng)IgG抗體檢測(cè)方法的比較分析[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜寄生蟲(chóng)學(xué)分會(huì)第六次代表大會(huì)暨第十一次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2011年

6 張方;王嘉祺;馬慧;;老年住院患者呼吸道常見(jiàn)病毒IgM抗體檢測(cè)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)呼吸病學(xué)術(shù)會(huì)議暨學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2006年

7 許慧;崔京濤;郝英英;倪安平;;巨細(xì)胞病毒IgG抗體親合力分析與IgM抗體檢測(cè)的評(píng)價(jià)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議資料匯編[C];2008年

8 吳敏慧;劉毅;劉洪莉;;血小板交叉配合及抗體檢測(cè)方法的建立及其應(yīng)用[A];中國(guó)輸血協(xié)會(huì)第四屆輸血大會(huì)論文集[C];2006年

9 許慧;崔京濤;郝英英;倪安平;;巨細(xì)胞病毒IgG抗體親合力分析與IgM抗體檢測(cè)的評(píng)價(jià)[A];第五次全國(guó)中青年檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

10 鄭優(yōu)榮;李少華;侯華嘉;黃小丹;陳沖;;廣州地區(qū)1995～1999年獻(xiàn)血人群HIV抗體檢測(cè)情況分析[A];中國(guó)輸血1999年年會(huì)暨紀(jì)念A(yù)BO血型發(fā)現(xiàn)100周年學(xué)術(shù)交流論文專輯[C];1999年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 通訊員 劉弈　鄧順梅;建始縣疫控中心抗體檢測(cè)技術(shù)全面更新[N];恩施日?qǐng)?bào);2009年

2 陳建忠;HIV抗體檢測(cè)女性注意事項(xiàng)[N];保健時(shí)報(bào);2004年

3 記者 戎明昌邋林亞茗 通訊員 郭云云;將HIV抗體檢測(cè)納入醫(yī)保[N];南方日?qǐng)?bào);2008年

4 ;動(dòng)物診斷用狂犬病抗體檢測(cè)試劑盒問(wèn)世[N];今日信息報(bào);2003年

5 浦 汶;變實(shí)驗(yàn)鼠為高效“抗體工廠”[N];大眾科技報(bào);2003年

6 ;最新調(diào)查顯示四成兒童體內(nèi)有SARS抗體[N];中國(guó)高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報(bào);2003年

7 本報(bào)記者 聶翠蓉;小小納米抗體潛力大[N];科技日?qǐng)?bào);2005年

8 張東;“檢得出，檢得了，，檢得好”[N];中國(guó)國(guó)門(mén)時(shí)報(bào);2005年

9 通訊員燕文華 張金生;沙灣采用抗體檢測(cè)牲畜防疫[N];伊犁日?qǐng)?bào)(漢);2009年

10 記者馮瑾;提倡新人接受病毒抗體檢測(cè)[N];新疆日?qǐng)?bào)(漢);2009年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 陳長(zhǎng)春;抗BONTS抗體的制備、篩選及抗體間協(xié)同保護(hù)機(jī)制的研究[D];上海交通大學(xué);2012年

2 付慶鋒;血清P53抗體與BRAF基因突變檢測(cè)在PTC診療中的決策作用[D];吉林大學(xué);2016年

3 潘鵬濤;基于p53抗體的腫瘤早期篩查及腫瘤檢測(cè)研究[D];東北師范大學(xué);2014年

4 高寶山;腎移植受者血清多反應(yīng)性抗體與HLA抗體的相關(guān)性及對(duì)移植腎長(zhǎng)期存活的影響[D];吉林大學(xué);2015年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 汪嘉佳;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)血小板脫糖方法建立及意義[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

2 毛倩倩;一種犬細(xì)小病毒IgG抗體檢測(cè)試劑盒的研制[D];南陽(yáng)師范學(xué)院;2015年

3 時(shí)曉麗;豬流行性腹瀉病毒N蛋白單克隆抗體的研制與抗原捕獲ELISA抗體檢測(cè)方法的建立[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

4 葉麗娜;北京地區(qū)牛傳染性鼻氣管炎血清學(xué)調(diào)查及其抗體檢測(cè)間接ELISA方法的建立[D];江西農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

5 劉學(xué)博;山東省不同地區(qū)不同人群三種流感病毒血凝素抗體水平調(diào)查[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

6 趙永祥;四川部分地區(qū)2013-2014年豬繁殖與呼吸綜合征流行病學(xué)調(diào)查[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

7 王芳蕊;天津市高致病性豬繁殖與呼吸綜合征流行病學(xué)調(diào)查及活疫苗應(yīng)用試驗(yàn)[D];吉林大學(xué);2016年

8 喬一丹;WTH3多克隆抗體的制備及其鑒定[D];吉林大學(xué);2016年

9 耿曉蕊;河北省某規(guī)模化豬場(chǎng)CSF、PRRS和PR抗體的檢測(cè)與分析[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2016年

10 李春燕;豬重要病毒檢測(cè)方法的建立及其在2015年陜西省豬群中的感染及抗體檢測(cè)[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2016年

本文編號(hào)：1112053