本文關(guān)鍵詞：廣西PRRSV地方流行毒株分子流行病學(xué)調(diào)查及不同豬群中PRRSV抗體檢測分析

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【摘要】：豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)作為一種高度接觸性傳染病,其病毒高度的變異是豬繁殖與呼吸綜合征免疫防控失敗的主要制約因素。結(jié)構(gòu)蛋白ORF5和非結(jié)構(gòu)蛋白Nsp2基因是進行PRRSV分子流行病學(xué)研究和病毒遺傳變異分析的靶基因,對研究藍耳病毒的ORF5和Nsp2基因有著十分重要的意義。本研究對2012-2015年問送檢的樣品進行檢測分析,通過對ORF5和Nsp2基因序列測定和分析,以及不同豬群中PRRSV抗體水平檢測分析,進一步了解廣西近年來PRRSV的流行趨勢及變異情況,為該病的綜合防控提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和理論依據(jù)。(1)本研究通過RT-PCR方法,對疑似感染PRRSV樣品進行病原檢查分析,共檢測到91份陽性樣品,陽性率為18.13%。對所獲陽性樣品進行PRRSV特異性片段擴增,獲得18條Nsp2基因序列和48條ORF5基因序列。Nsp2基因序列分析結(jié)果顯示：18個Nsp2基因與NCBI所收錄的部分參考毒株相應(yīng)核苷酸序列及其推導(dǎo)氨基酸同源性為51.9～99.1%和30.4～98.7%。所獲Nsp2推導(dǎo)氨基酸與JXA1株的同源性最高。48個ORF5基因NCBI部分參考毒株相應(yīng)核苷酸及推導(dǎo)氨基酸的同源性為61.8～99.7%和52.7-99.0%。以O(shè)RF5基因為主,結(jié)合Nsp2基因進行遺傳進化分析,結(jié)果表明廣西流行的PRRSV毒株分屬于美洲型的2個亞群,主要是以JXA1為代表的Ⅳ亞群以及少數(shù)以HB-1(sh)/2002株為代表的Ⅲ亞群。氨基酸序列分些結(jié)果表明,所獲得的18個Nsp2基因中有15個存在與JXA1株一樣位置的30個不連續(xù)氨基酸的缺失。與VR-2332毒株相比,ORF5編碼的GP5蛋白中出現(xiàn)大量氨基酸的突變,特別是在B細胞表位的中和抗原表位(PNE)、T細胞表位以及潛在糖基化位點。與廣西過去10年NCBI所收錄部分參考毒株(89株)相比,自2012年以來,氨基酸位點突變率明顯提高,主要集中在氨基酸位點R151K(18/48,突變率37.5%)；E170Q(14/48,突變率29.17%)；V185A(48/48,突變率100%)；Q196R/L(33/48,突變率68.75%)。而與之相比,參考毒株89株中發(fā)生突變的氨基酸R151→K151(2/89,突變率為2.24%)；E170Q(9/89,突變率10.11%)；V185A(63/89,突變率70.78%)；Q196R/L(7/89,突變率7.86%)。推測這些位點的突變將是今后廣西流行毒株突變的一個趨勢。且這些突變導(dǎo)致的蛋白內(nèi)在結(jié)構(gòu)變化、糖基位點的缺失可能會影響中和抗體產(chǎn)生的速度與數(shù)量。結(jié)合進化樹分析結(jié)果,親緣關(guān)系與NCDA30毒株最近的三個毒株GXBS120815. GXYL130617. GXYL 130624氨基酸位點151、170、189、191、192等突變方向與NADC30株的突變方向一致,表明廣西存在NADC30-like毒株流行,推測可能與NADC30株來源于同一株,且特定位點突變方向可以作為參考毒株是否與NCDA30毒株源于同一毒株的參考性指標。(2)為研究免疫壓力下PRRSV免疫情況,對廣西某地區(qū)2014-201 5年春秋兩季在養(yǎng)殖場、散養(yǎng)戶、屠宰場等采集的2228份血清進行PRRSV抗體及部分樣品病原檢測。依據(jù)豬群養(yǎng)殖規(guī)模及來源分類,本研究獲得PRRSV抗體陽性樣品為1698份,陽性率為76.21%,S/P值2.5的比例占8.66%；規(guī)模種豬場及500頭以上的規(guī)模養(yǎng)殖場,陽性率最高達92.5%,S/P值2.5的最低比例為2.03%。散養(yǎng)戶抗體合格率最低,陽性率為51-31-68.42%,免疫效果最差,S/P值2.5的比例高達16.28%。研究表明某地區(qū)種豬場及中大型規(guī)模養(yǎng)殖場豬群比較穩(wěn)定,免疫效果最好,而散養(yǎng)戶豬群免疫效果最差且不穩(wěn)定,存在野毒感染的風(fēng)險。依據(jù)豬群年齡、性別、用途分類,采集2228份的血清進行PRRSV抗體,結(jié)果獲得PRRSV抗體陽性樣品為1648份,陽性率為73.97%,S/P值2.5比例為8.59%。豬群公豬的免疫效果最好,陽性率83.33-94.44%,S/P值在1.38～1.44,S/P位2.5最高比例2.32%。保育豬抗體陽性率為66.07-70.05%,S/P值2.5比例最低為13.53%。數(shù)據(jù)分析表明種豬群處于最穩(wěn)定狀態(tài),不同群體之間抗體水平參差不齊,整體豬群雖較為穩(wěn)定,但野毒感染風(fēng)險較大。分析不同疫苗廠家免疫PRRSV抗體情況表明,不同廠家疫苗免疫效果差異顯著,2014～2015年政府采購疫苗抗體陽性率分別為71.81～82.32%,73.15～88.55%,總陽性率為79.27%。非政府采購疫苗抗體陽性率分別為79.22%～89.91%,83.11～91.60%,總陽性率為83.17%。2014～2015年弱毒疫苗抗體陽性率85.4%,87.23%,滅活苗抗體陽性率73.33%,76.68%,PRRS弱毒疫苗免疫效果要優(yōu)于滅活疫苗。此外,對廣西某地區(qū)送檢的55份樣品中,獲得11條ORF5基因序列,序列同源性及遺傳進化分析表明,11株均為美洲型毒株,與JXA1株同源性最高,提示某地區(qū)主要以JXA1株為代表的高致病性藍耳病的Ⅳ亞群,及僅少數(shù)分布于HB-1(sh)/2002為代表的Ⅲ亞群在流行,與整個廣西地區(qū)流行的PRRS趨勢一致。
【關(guān)鍵詞】：豬繁殖與呼吸綜合征病毒 分子流行病學(xué) 序列分析 抗體檢測
【學(xué)位授予單位】：廣西大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S858.28
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-11
• 縮略詞表11-15
• 第一章 綜述15-31
• 1.1 豬繁殖與呼吸綜合征簡介15
• 1.2 PRRSV的病原學(xué)研究15-17
• 1.2.1 病毒屬性15-16
• 1.2.2 病毒生物學(xué)特性16-17
• 1.3 PRRSV基因結(jié)構(gòu)17-23
• 1.3.1 基因組結(jié)構(gòu)17-19
• 1.3.2 各基因組編碼的蛋白及功能19-23
• 1.4 我國PRRS流行情況23-24
• 1.5 基因的多樣性和變異性24-26
• 1.6 PRRS抗體的概述26-28
• 1.6.1 天然免疫26
• 1.6.2 體液免疫26-27
• 1.6.3 細胞免疫27-28
• 1.7 PRRSV診斷方法28-29
• 1.7.1 血清學(xué)診斷方法28-29
• 1.7.2 分子生物學(xué)診斷方法29
• 1.8 研究目的和意義29-30
• 1.9 技術(shù)路線30-31
• 第二章 2012～2015年廣西地區(qū)PRRSV分子流行病學(xué)調(diào)查31-86
• 2.1 材料31-35
• 2.1.1 實驗主要儀器設(shè)備31
• 2.1.2 主要試劑及菌株31
• 2.1.3 常用試劑的配制31-32
• 2.1.4 引物設(shè)計32-33
• 2.1.5 生物學(xué)軟件33
• 2.1.6 國內(nèi)外參考序列33-35
• 2.2 方法35-40
• 2.2.1 病料等樣品處理35-36
• 2.2.2 病毒RNA的提取36
• 2.2.3 PRRSV RT-PCR的檢測36-37
• 2.2.4 Nsp2基因及ORF5基因擴增、測序與分析37-40
• 2.3 結(jié)果與分析40-81
• 2.3.1 PRRSV流行毒株RT-PCR檢測結(jié)果40-42
• 2.3.2 PRRSV特異片段Nsp2及ORF5基因的擴增結(jié)果42-43
• 2.3.3 流行毒株Nsp2基因序列分析43-49
• 2.3.4 流行毒株ORF5基因序列分析49-64
• 2.3.5 本研究流行毒株與廣西2004～2015年部分毒株對比分析64-81
• 2.4 討論與分析81-86
• 2.4.1 廣西PRRSV的流行情況81
• 2.4.2 Nsp2基因變異分析81-82
• 2.4.3 ORF5基因變異分析82-86
• 第三章 豬群中PRRSV抗體檢測分析86-103
• 3.1 實驗材料86-87
• 3.1.1 主要實驗設(shè)備86
• 3.1.2 主要實驗試劑86
• 3.1.3 豬群的選定86-87
• 3.1.4 生物學(xué)軟件87
• 3.1.5 引物設(shè)計87
• 3.2 實驗方法87-88
• 3.2.1 血清樣品及組織病料的采集87
• 3.2.2 豬群血清PRRSV抗體檢測87
• 3.2.3 病料樣品處理87-88
• 3.2.4 樣品病毒RNA的提取88
• 3.2.5 PRRSV RT-PCR的檢測88
• 3.3 實驗結(jié)果88-99
• 3.3.1 豬群血清PRRSV抗體檢測結(jié)果分析88-93
• 3.3.2 不同疫苗廠家豬群血清PRRSV抗體檢測結(jié)果分析93-95
• 3.3.3 血清及病料樣品的RT-PCR檢測95-96
• 3.3.4 ORF5基因的擴增96
• 3.3.5 ORF5基因序列分析96-99
• 3.4 討論與分析99-103
• 3.4.1 不同豬群中抗體水平分析99-100
• 3.4.2 不同疫苗廠家所產(chǎn)生抗體水平分析100-101
• 3.4.3 豬群中分子病原學(xué)分析101
• 3.4.4 PRRS防控101-103
• 第四章 全文結(jié)論103-104
• 參考文獻104-116
• 致謝116-117
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文情況117

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1 黃運茂;蘇記良;于迎春;李孝偉;施振旦;;利用羊抗雞抗體檢測鵝血漿中的抗體水平[J];華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報;2007年02期

2 曹凱云;;生豬抗體檢測,何時能為豬場保駕護航?[J];北方牧業(yè);2011年12期

3 顏立成,許進香;間接酶聯(lián)免疫吸附測定法的第二抗體取代試驗[J];獸醫(yī)大學(xué)學(xué)報;1984年02期

4 田克恭,王樹勤,孫巖松,彭傳貴;某獼猴繁育場B病毒相關(guān)抗體檢測報告[J];中國獸醫(yī)雜志;1993年01期

5 許文珍;王銳麗;周世應(yīng);;鵪鶉新域疫抗體消長測定[J];云南畜牧獸醫(yī);1989年03期

6 劉堯服;徐蘭芳;曾志明;楊亮;陳宙;尹政;;玻板血凝和血凝抑制試驗在雞新城疫病毒鑒定和抗體檢測中的應(yīng)用[J];江西畜牧獸醫(yī)雜志;1985年03期

7 王連想;任裕其;盧洪芬;閆曉菊;梁紅梅;孫彥偉;;廣東省豬繁殖與呼吸綜合征抗體十年檢測結(jié)果分析[J];廣東畜牧獸醫(yī)科技;2007年02期

8 吳惠英,賀爭鳴,衛(wèi)禮,王秀清,雷培琪;對實驗鼠群LCM抗體檢測方法研究[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報;1989年S1期

9 金顏輝;夏曉紅;楊佳;吳波平;許先明;林芬;黃雁;;二種狂犬病抗體檢測方法的應(yīng)用比較[J];福建畜牧獸醫(yī);2011年05期

10 田克恭,遇秀玲,藺會云,韋毅,饒軍,華吳娜;B病毒抗原片在獼猴B病毒抗體檢測中的應(yīng)用[J];中國實驗動物學(xué)雜志;2002年02期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 全慧芬;;愛滋病流行狀況及孕產(chǎn)婦免費病毒抗體檢測宣教[A];中國水利電力醫(yī)學(xué)科學(xué)技術(shù)學(xué)會臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)委員會外科專業(yè)、護理專業(yè)2007年會論文匯編[C];2007年

2 虞偉;張瑾;顧晨曦;賈麗;李曉軍;武建國;;三種不同固相化方法用于抗CCP抗體的測定研究與結(jié)果評價[A];第六屆全國免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會論文集[C];2008年

3 張申英;張欣欣;劉晶;盧敏;汪垣;;重組丙型肝炎病毒包膜蛋白2抗體檢測及其臨床意義[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國感染病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2001年

4 孫建新;吉旭陽;畢曉郁;;丙肝病毒單片段抗體檢測分析[A];第十屆全軍檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2005年

5 劉帥;王貝貝;崔麗麗;靳興軍;張躍;汪明;;幾種弓形蟲IgG抗體檢測方法的比較分析[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜寄生蟲學(xué)分會第六次代表大會暨第十一次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2011年

6 張方;王嘉祺;馬慧;;老年住院患者呼吸道常見病毒IgM抗體檢測[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國呼吸病學(xué)術(shù)會議暨學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2006年

7 許慧;崔京濤;郝英英;倪安平;;巨細胞病毒IgG抗體親合力分析與IgM抗體檢測的評價[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議資料匯編[C];2008年

8 吳敏慧;劉毅;劉洪莉;;血小板交叉配合及抗體檢測方法的建立及其應(yīng)用[A];中國輸血協(xié)會第四屆輸血大會論文集[C];2006年

9 許慧;崔京濤;郝英英;倪安平;;巨細胞病毒IgG抗體親合力分析與IgM抗體檢測的評價[A];第五次全國中青年檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2006年

10 鄭優(yōu)榮;李少華;侯華嘉;黃小丹;陳沖;;廣州地區(qū)1995～1999年獻血人群HIV抗體檢測情況分析[A];中國輸血1999年年會暨紀念A(yù)BO血型發(fā)現(xiàn)100周年學(xué)術(shù)交流論文專輯[C];1999年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 通訊員 劉弈　鄧順梅;建始縣疫控中心抗體檢測技術(shù)全面更新[N];恩施日報;2009年

2 陳建忠;HIV抗體檢測女性注意事項[N];保健時報;2004年

3 記者 戎明昌邋林亞茗 通訊員 郭云云;將HIV抗體檢測納入醫(yī)保[N];南方日報;2008年

4 ;動物診斷用狂犬病抗體檢測試劑盒問世[N];今日信息報;2003年

5 浦 汶;變實驗鼠為高效“抗體工廠”[N];大眾科技報;2003年

6 ;最新調(diào)查顯示四成兒童體內(nèi)有SARS抗體[N];中國高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報;2003年

7 本報記者 聶翠蓉;小小納米抗體潛力大[N];科技日報;2005年

8 張東;“檢得出，檢得了，，檢得好”[N];中國國門時報;2005年

9 通訊員燕文華 張金生;沙灣采用抗體檢測牲畜防疫[N];伊犁日報(漢);2009年

10 記者馮瑾;提倡新人接受病毒抗體檢測[N];新疆日報(漢);2009年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 陳長春;抗BONTS抗體的制備、篩選及抗體間協(xié)同保護機制的研究[D];上海交通大學(xué);2012年

2 付慶鋒;血清P53抗體與BRAF基因突變檢測在PTC診療中的決策作用[D];吉林大學(xué);2016年

3 潘鵬濤;基于p53抗體的腫瘤早期篩查及腫瘤檢測研究[D];東北師范大學(xué);2014年

4 高寶山;腎移植受者血清多反應(yīng)性抗體與HLA抗體的相關(guān)性及對移植腎長期存活的影響[D];吉林大學(xué);2015年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 汪嘉佳;流式細胞術(shù)檢測血小板脫糖方法建立及意義[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

2 毛倩倩;一種犬細小病毒IgG抗體檢測試劑盒的研制[D];南陽師范學(xué)院;2015年

3 時曉麗;豬流行性腹瀉病毒N蛋白單克隆抗體的研制與抗原捕獲ELISA抗體檢測方法的建立[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

4 葉麗娜;北京地區(qū)牛傳染性鼻氣管炎血清學(xué)調(diào)查及其抗體檢測間接ELISA方法的建立[D];江西農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

5 劉學(xué)博;山東省不同地區(qū)不同人群三種流感病毒血凝素抗體水平調(diào)查[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

6 趙永祥;四川部分地區(qū)2013-2014年豬繁殖與呼吸綜合征流行病學(xué)調(diào)查[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

7 王芳蕊;天津市高致病性豬繁殖與呼吸綜合征流行病學(xué)調(diào)查及活疫苗應(yīng)用試驗[D];吉林大學(xué);2016年

8 喬一丹;WTH3多克隆抗體的制備及其鑒定[D];吉林大學(xué);2016年

9 耿曉蕊;河北省某規(guī)�；i場CSF、PRRS和PR抗體的檢測與分析[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2016年

10 李春燕;豬重要病毒檢測方法的建立及其在2015年陜西省豬群中的感染及抗體檢測[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2016年

本文編號：1112053