本文關(guān)鍵詞：牛布魯氏菌間接ELISA抗體檢測方法的建立

  更多相關(guān)文章： 布魯氏菌 間接ELISA 特異性 敏感性

【摘要】：【目的】建立高通量牛布魯氏菌間接ELISA診斷方法,為科學(xué)高效診斷牛布魯氏菌病提供技術(shù)手段。【方法】以提純的豬布魯氏菌S2株脂多糖(LPS)作為包被抗原,采用棋盤滴定法確定了抗原包被濃度、包被液、抗原包被時(shí)間、封閉液、樣品稀釋液、血清稀釋倍數(shù)、兔抗牛酶標(biāo)抗體稀釋液、兔抗牛酶標(biāo)抗體稀釋濃度、最佳TMB底物反應(yīng)時(shí)間等參數(shù),初步建立了牛布魯氏菌間接ELSIA方法。并用上述條件初步建立的方法對176份牛布魯氏菌病陽性血清和132份牛布魯氏菌病陰性血清進(jìn)行檢測。檢測結(jié)果經(jīng)SPSS17.0軟件分析,構(gòu)建受試者工作特征曲線(ROC)及曲線下面積,確定敏感性和特異性;通過Youden指數(shù)確定陰陽性判定的臨界點(diǎn)。使用質(zhì)控陰、陽性血清評價(jià)試劑盒的批內(nèi)和批間重復(fù)性。用本研究建立的ELISA試劑盒及商品化試劑盒同時(shí)對臨床上1 200份牛血清樣本進(jìn)行比對檢測,比較其符合率�！窘Y(jié)果】通過棋盤法確定的試劑盒中各組分的最佳條件為:抗原包被濃度為10μg·m L-1,最適包被液為碳酸鹽緩沖液,最佳包被時(shí)間為2—8℃、16 h,最適血清稀釋度為1㑳50,最佳封閉液為含有3%明膠的PBST,最佳樣品稀釋液為含有0.5%蔗糖的PBST,最佳兔抗牛酶標(biāo)抗體稀釋液為含有5%馬血清的PBST,最佳兔抗牛酶標(biāo)抗體工作濃度為1㑳20 000,最佳TMB底物反應(yīng)時(shí)間為15 min。按上述條件建立的間接ELISA方法檢測176份牛布魯氏菌病陽性血清和132份牛布魯氏菌陰性血清,并統(tǒng)計(jì)結(jié)果后使用SPSS17.0軟件分析該方法受試者工作特征曲線(ROC)線下面積為0.98。最佳判定臨界點(diǎn)為樣本OD值/陽性O(shè)D值(S/P)×100%=20%。在此臨界值上時(shí),敏感性為97.7%,特異性為95.5%。對1 200份臨床樣本的比對檢測顯示,本研究建立的間接ELISA方法與進(jìn)口商品化試劑盒的總符合率為96.25%�！窘Y(jié)論】建立了特異性和敏感性良好的牛布魯氏菌間接ELISA抗體檢測方法。
【作者單位】： 中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所檢測技術(shù)室;山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 布魯氏菌 間接ELISA 特異性 敏感性
【基金】：國家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃(“863”計(jì)劃)(2012AA101302) 北京市科技新星計(jì)劃(XX2013099)
【分類號】：S855.12
【正文快照】： 產(chǎn)權(quán)的牛布魯氏菌ELISA診斷試劑盒對布病防控具0引言有重要的現(xiàn)實(shí)意義。中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所檢測技術(shù)【研究意義】布魯氏菌病(布病)是由布魯氏菌室長期從事布病診斷方法的研究,并初步探索了包(Brucella)引起的以流產(chǎn)和發(fā)熱為特征的人獸共患被抗原的效果差異,積累了足夠數(shù)量的布

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 王君瑋,尹燕博,劉清河,郭福生,孫淑芳,趙德明,王志亮;雞傳染性支氣管炎ELISA抗體檢測試劑盒的研制[J];中國動(dòng)物檢疫;2004年03期

2 王樂義;雞傳染性支氣管炎ELISA抗體檢測試劑盒的研究[J];中國動(dòng)物檢疫;2005年09期

3 馬飛;;雞傳染性法氏囊病間接ELISA抗體檢測試劑盒的研制[J];上海畜牧獸醫(yī)通訊;2005年06期

4 韓蓉;時(shí)曉麗;趙攀登;白娟;李玉峰;王先煒;姜平;;豬流行性腹瀉病毒間接ELISA抗體檢測方法建立與應(yīng)用[J];畜牧與獸醫(yī);2013年02期

5 郭艷,付朝陽,宋素泉,高宏雷,王笑梅,王英,張厚雙,王曉艷,胡建民;J亞群禽白血病ELISA抗體檢測方法的建立[J];中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào);2005年04期

6 臧瑩安;黃彩梅;李婉雁;李淼;宋帥;李春玲;;副豬嗜血桿菌OMP P5間接ELISA抗體檢測方法優(yōu)化[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2012年09期

7 周宗安,劉勁松,房德興,王元倫,顧志香,蘇承忠,熊仲良,高瑞倫;豬瘟ELISA抗體與免疫保護(hù)力的相關(guān)性研究[J];中國獸醫(yī)科技;1991年11期

8 ;[J];;年期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 鐘澤棟;文心田;曹三杰;黃小波;;豬流行性乙型腦炎病毒間接ELISA抗體檢測試劑盒的研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物傳染病學(xué)分會(huì)第十二次人獸共患病學(xué)術(shù)研討會(huì)暨第六屆第十四次教學(xué)專業(yè)委員會(huì)論文集[C];2012年

2 梅仕林;何誠;栗紹文;孟憲榮;畢丁仁;喻翠翠;張望;;豬流產(chǎn)嗜性衣原體間接ELISA抗體檢測方法的建立[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物傳染病學(xué)分會(huì)第三屆豬病防控學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

3 郝明飛;張琳;胡北俠;許傳田;楊少華;崔言順;張秀美;;鴨坦布蘇病毒包膜蛋白的原核表達(dá)和間接ELISA抗體檢測方法的建立[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)禽病學(xué)分會(huì)第十六次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2012年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 王單晶;牛傳染性鼻氣管炎阻斷ELISA抗體檢測方法的建立與應(yīng)用[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

2 白如念;雞傳染性法氏囊病間接ELISA抗體檢測試劑盒的研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

3 鄭玲燕;傳染性法氏囊病毒VP2基因的克隆、表達(dá)及ELISA抗體檢測方法的建立[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

4 陳穩(wěn);豬圓環(huán)病毒2型ORF2蛋白原核表達(dá)及其ELISA抗體檢測方法的建立[D];河南農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

，

本文編號：1105103