本文關(guān)鍵詞：一株少孢節(jié)叢孢菌的分離鑒定及捕食效率研究

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【摘要】：為了解少孢節(jié)叢孢菌(Arthrobotrys oligospora)的生物學特點和捕食能力,本試驗由青海省祁連地區(qū)采集土壤樣品,采用玉米粉瓊脂(CMA)培養(yǎng)基分離了一株捕食線蟲性真菌,根據(jù)菌絲、分生孢子的形態(tài)特點以及捕獲蟲體的方式初步判定為少孢節(jié)叢孢菌。對分離菌株的ITS2基因進行了PCR擴增、序列測序、系統(tǒng)進化樹分析和同源性比對,結(jié)果發(fā)現(xiàn)本試驗分離的菌株與Gene Bank數(shù)據(jù)庫上公布的少孢節(jié)叢孢菌(Arthrobotrys oligospora)ATCC株和少孢節(jié)叢孢菌(Arthrobotrys oligospora)XAo1株在同一個分支上并且三個菌株之間的同源性達到了100%,表明本試驗分離菌株確實為少孢節(jié)叢孢菌,暫定名為少孢節(jié)叢孢菌QHQL株。形態(tài)學特點研究結(jié)果顯示少孢節(jié)叢孢菌末梢菌絲界限分明,中間菌絲錯亂無規(guī)則,單個分生孢子呈倒卵形,多個分生孢子花瓣樣排列生長,掃描電鏡觀察發(fā)現(xiàn)菌絲、分生孢子、以及分生孢子梗上均有明顯的隔,透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)隔的形成是由于細胞膜在特定的位置向內(nèi)彎曲生長而形成的;物理化學特點研究結(jié)果顯示革蘭氏染色呈陰性,最適生長溫度為21℃,最適生長p H為6;捕食特性研究發(fā)現(xiàn)少孢節(jié)叢孢菌經(jīng)線蟲蟲體誘導后產(chǎn)生捕食器官,蟲體被捕獲后在48 h以內(nèi)被消耗殆盡。以玉米粉瓊脂(CMA)作為培養(yǎng)基的捕食效率試驗和以羊糞便作為培養(yǎng)基的捕食效率試驗結(jié)果分別為86.21%和73.91%。
【關(guān)鍵詞】：少孢節(jié)叢孢菌 分離 鑒定 捕食效率
【學位授予單位】：青海大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S852.6
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 第1章 文獻綜述9-14
• 1.1 前言9-10
• 1.2 捕食線蟲性真菌的研究進展10-12
• 1.3 少孢節(jié)叢孢菌的研究進展12-14
• 第2章 少孢節(jié)叢孢菌的分離純化和ITS2基因的PCR擴增及分析14-26
• 2.1 材料14-15
• 2.1.1 試劑14
• 2.1.2 儀器14
• 2.1.3 樣品14-15
• 2.2 方法15-19
• 2.2.1 0.4 G/L玉米粉瓊脂（CMA）培養(yǎng)基的制備15
• 2.2.2 土壤線蟲的培養(yǎng)15
• 2.2.3 少孢節(jié)叢孢菌的分離培養(yǎng)15
• 2.2.4 少孢節(jié)叢孢菌的純化15
• 2.2.5 少孢節(jié)叢孢菌基因組DNA的提取15-16
• 2.2.6 ITS2基因引物的設(shè)計16-17
• 2.2.7 ITS2基因的PCR擴增17
• 2.2.8 基因組DNA與ITS2基因PCR擴增產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳17-18
• 2.2.9 ITS2基因PCR擴增產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化試驗及測序18-19
• 2.3 結(jié)果19-24
• 2.3.1 少孢節(jié)叢孢菌的分離及純化19-20
• 2.3.2 基因組DNA的瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果20-21
• 2.3.3 ITS2基因PCR擴增產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果21-22
• 2.3.4 ITS2基因PCR擴增產(chǎn)物的測序結(jié)果22
• 2.3.5 對ITS2基因測序結(jié)果的分析22-24
• 2.4 討論24-26
• 第3章 少孢節(jié)叢孢菌生物學特點研究26-37
• 3.1 材料26
• 3.1.1 試劑26
• 3.1.2 儀器26
• 3.2 方法26-28
• 3.2.1 少孢節(jié)叢孢菌形態(tài)學特點研究26-27
• 3.2.1.1 樣品的制備及顯微成像系統(tǒng)觀察26
• 3.2.1.2 掃描電鏡樣品制備及觀察26-27
• 3.2.1.3 透射電鏡樣品的制備及觀察27
• 3.2.2 少孢節(jié)叢孢菌物理化學特點研究27-28
• 3.2.2.1 少孢節(jié)叢孢菌的革蘭氏染色27
• 3.2.2.2 少孢節(jié)叢孢菌最適生長溫度的測定27-28
• 3.2.2.3 少孢節(jié)叢孢菌最適生長pH的測定28
• 3.2.2.4 少孢節(jié)叢孢菌厭氧培養(yǎng)28
• 3.2.3 少孢節(jié)叢孢菌捕食特點研究28
• 3.3 結(jié)果28-34
• 3.3.1 少孢節(jié)叢孢菌形態(tài)學特點研究28-31
• 3.3.1.1 顯微成像觀察28-29
• 3.3.1.2 掃描電鏡觀察29-30
• 3.3.1.3 透射電鏡觀察30-31
• 3.3.2 少孢節(jié)叢孢菌物理化學特點研究31-33
• 3.3.2.1 少孢節(jié)叢孢菌革蘭氏染色31-32
• 3.3.2.2 最適生長溫度測定結(jié)果32-33
• 3.3.2.3 最適生長pH的測定結(jié)果33
• 3.3.2.4 厭氧培養(yǎng)結(jié)果33
• 3.3.3 少孢節(jié)叢孢菌的捕食特性研究33-34
• 3.4 討論34-37
• 第4章 少孢節(jié)叢孢菌捕食效率研究37-42
• 4.1 材料37
• 4.1.1 試劑37
• 4.1.2 糞便樣品及線蟲來源37
• 4.2 方法37-38
• 4.2.1 少孢節(jié)叢孢菌分生孢子制劑的制作37
• 4.2.2 羊真胃線蟲三期幼蟲的孵化培養(yǎng)37-38
• 4.2.3 以玉米粉瓊脂作為培養(yǎng)基的捕食效率試驗38
• 4.2.4 以糞便作為培養(yǎng)基的捕食效率試驗38
• 4.3 結(jié)果38-40
• 4.3.1 羊真胃線蟲三期幼蟲的孵化培養(yǎng)38-39
• 4.3.2 以玉米粉瓊脂（CMA）作為培養(yǎng)基的捕食效率試驗39-40
• 4.3.3 以糞便作為培養(yǎng)基的捕食效率試驗40
• 4.4 討論40-42
• 結(jié)論42-43
• 展望43-44
• 參考文獻44-49
• 致謝49-50
• 作者簡介50

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本文編號：1102238