本文關(guān)鍵詞：神經(jīng)肽Y（NPY）及其受體在母雞生殖道的分布研究

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【摘要】：在母雞輸卵管子宮陰道交接部及漏斗部存在一特殊的管狀腺,能夠使雞精子長期存活并保持受精能力,因其具有長期貯存精子的能力,而被稱為貯精腺,前期研究表明,NPY基因是禽類子宮陰道交接部的差異表達(dá)基因,推測母雞生殖道中的NPY可能參與調(diào)控精子活力。本試驗(yàn)利用免疫組織化學(xué)法檢測NPY、NPY受體(NPY1R和NPY5R)在產(chǎn)蛋期母雞生殖道的分布,結(jié)果表明NPY和NPY1R在母雞生殖道的表達(dá)比較一致,NPY和NPY1R在漏斗部、峽部、膨大部及子宮的粘膜上皮均有表達(dá),且NPY在漏斗部粘膜上皮陽性信號最強(qiáng),其次為膨大部和峽部,而NPY1R在膨大部和峽部粘膜上皮的陽性信號最強(qiáng)。用雞NPY及其受體NPY1R和NPY5R的保守區(qū)設(shè)計(jì)特異性引物,內(nèi)參基因選擇雞β-actin基因,利用熒光定量分析雞NPY基因及其受體NPY1R、NPY5R在母雞輸卵管漏斗部、膨大部、峽部、子宮、子宮陰道交接處及陰道的表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn),NPY在峽部及陰道部的表達(dá)量顯著高于輸卵管其他部位(P0.05);NPY1R在陰道部的表達(dá)量顯著高于輸卵管其他部位(P0.05);NPY5R在子宮陰道交接部和陰道的表達(dá)量顯著高于輸卵管其他部位(P0.05)。根據(jù)GenBank上公布的雞NPY序列合成符合畢赤酵母密碼子偏好性的NPY基因,并連接至真核表達(dá)載體pPICZαA中,將重組質(zhì)粒電轉(zhuǎn)至畢赤酵母菌GS115中,用終濃度為1%的甲醇進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),通過聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)和Western Blot檢測,結(jié)果表明重組酵母菌成功分泌雞NPY蛋白,大小約為35kDa。
【關(guān)鍵詞】：神經(jīng)肽Y NPY1R NPY5R 免疫組織化學(xué) 熒光定量PCR 畢赤酵母
【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S831
【目錄】：

• 摘要6-7
• ABSTRACT7-9
• 縮略詞表(Abbreviation)9-11
• 1 文獻(xiàn)綜述11-21
• 1.1 神經(jīng)肽Y（NPY）及其受體研究進(jìn)展11-14
• 1.1.1 NPY的研究進(jìn)展11-12
• 1.1.2 NPY1R的研究進(jìn)展12-13
• 1.1.3 NPY5R的研究進(jìn)展13-14
• 1.2 畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)的研究進(jìn)展14-20
• 1.2.1 蛋白表達(dá)系統(tǒng)14-15
• 1.2.2 酵母表達(dá)系統(tǒng)15
• 1.2.3 巴斯德畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)15-20
• 1.3 本研究的目的和意義20-21
• 2 NPY及其受體在母雞生殖道的表達(dá)21-28
• 2.1 前言21
• 2.2 試驗(yàn)材料21-22
• 2.2.1 試驗(yàn)動物21
• 2.2.2 主要藥品及試劑21
• 2.2.3 常用試劑的配制21-22
• 2.2.4 主要儀器22
• 2.3 試驗(yàn)方法22-23
• 2.3.1 石蠟包埋22
• 2.3.2 制備石蠟切片22
• 2.3.3 免疫組化步驟22-23
• 2.4 結(jié)果分析23-27
• 2.5 討論27-28
• 3 NPY及其受體在母雞輸卵管不同部位的表達(dá)28-37
• 3.1 前言28
• 3.2 材料與方法28-31
• 3.2.1 試驗(yàn)材料28-29
• 3.2.2 試驗(yàn)方法29-31
• 3.3 結(jié)果分析31-35
• 3.3.1 總RNA的提取與檢測31-32
• 3.3.2 NPY基因PCR條件的確定32
• 3.3.3 NPY1R基因PCR條件的確定32-33
• 3.3.4 NPY5R基因PCR條件的確定33
• 3.3.5 NPY基因熒光定量結(jié)果33-34
• 3.3.6 NPY1R基因熒光定量結(jié)果34
• 3.3.7 NPY5R基因熒光定量結(jié)果34-35
• 3.4 討論35-37
• 4 NPY在畢赤酵母中的表達(dá)37-58
• 4.1 前言37
• 4.2 材料與方法37-53
• 4.2.1 材料37-41
• 4.2.2 試驗(yàn)方法41-53
• 4.3 結(jié)果與分析53-56
• 4.3.1 重組表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建53-54
• 4.3.2 重組質(zhì)粒線性化檢測54-55
• 4.3.3 陽性轉(zhuǎn)化子的PCR鑒定55
• 4.3.4 Tricine-SDS-PAGE和Western Blot檢測結(jié)果55-56
• 4.3.5 蛋白濃度檢測結(jié)果56
• 4.4 討論56-58
• 5 結(jié)語58-59
• 5.1 全文總結(jié)58
• 5.2 進(jìn)一步研究內(nèi)容58-59
• 參考文獻(xiàn)59-66
• 附錄Ⅰ 關(guān)鍵詞索引66-67
• 致謝67

【參考文獻(xiàn)】

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 楊亞娟;畢赤酵母（P.Pastoris）的rhIL-1表達(dá)量與載體—受體相關(guān)性研究[D];河南師范大學(xué);2014年

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本文編號：1100485