發(fā)布時間：2017-10-24 17:40

  本文關(guān)鍵詞：ApoCIII引發(fā)豬血管內(nèi)皮細胞炎癥反應的分子通路分析

  更多相關(guān)文章： ApoCIII 豬 血管內(nèi)皮細胞 炎癥反應 分子通路

【摘要】：血管內(nèi)皮細胞是構(gòu)成血管內(nèi)皮的主要成分,能夠保持血管內(nèi)膜的完整性,從而維持血管的正常功能。血管內(nèi)皮細胞在生理狀態(tài)下對血管的舒張與收縮、凝血與抗凝、細胞粘附及血管平滑肌細胞增殖遷移等具有重要的調(diào)節(jié)作用,其在病理狀態(tài)下可參與炎癥的發(fā)生和血栓的形成。血管內(nèi)皮細胞被激活后,可以分泌大量的炎癥因子,對炎癥細胞的功能進行調(diào)節(jié),從而參與炎癥過程。載脂蛋白CIII(Apolipoprotein CIII,Apo CIII)是在肝臟和小腸合成的由79個氨基酸組成的單鏈多肽,主要存在于乳糜顆粒、極低密度脂蛋白的表面。Apo CIII具有抑制脂蛋白脂酶活性和抑制肝臟富甘油三酯脂蛋白代謝清除等作用,并通過一系列生物學作用最終引起血管再狹窄和動脈粥樣硬化的發(fā)生。本研究通過在體外培養(yǎng)豬血管內(nèi)皮細胞過程中添加Apo CIII模擬其引發(fā)血管內(nèi)皮細胞發(fā)生炎癥反應的過程,并利用深度測序等方法探求Apo CIII引發(fā)細胞炎癥的關(guān)鍵細胞因子及分子通路。本實驗首先體外培養(yǎng)豬主動脈血管內(nèi)皮細胞,采用實時熒光定量PCR及ELISA法檢測添加不同濃度Apo CIII對血管內(nèi)皮細胞中粘附因子(VCAM-1、ICAM-1)和促炎細胞因子(IL-6、TNF-α)m RNA和蛋白表達水平的影響,篩選出Apo CIII的適宜添加濃度。結(jié)果表明添加Apo CIII后血管內(nèi)皮細胞形態(tài)由多角形變?yōu)樗笮?且添加濃度為50μg/ml時能顯著上調(diào)ICAM-1、VCAM-1 m RNA表達水平,細胞培養(yǎng)上清中IL-6和TNF-α的蛋白表達水平也顯著增加。隨后,利用高通量測序技術(shù)篩選出Apo CIII刺激前后的差異表達基因,并采用實時熒光定量PCR驗證測序的結(jié)果。結(jié)果表明,Apo CIII處理組的血管內(nèi)皮細胞中共有647個差異表達基因與未處理組相比差異顯著,包括390個上調(diào)表達基因和257個下調(diào)表達基因。Pathway分析結(jié)果顯示差異基因主要涉及免疫應答、炎癥反應等信號通路,其中MAPK通路涉及21個基因。最后,進一步通過Western blot檢測Apo CIII對MAPK信號通路相關(guān)信號因子磷酸化水平的影響,并通過ELISA法檢測MAPK抑制劑與Apo CIII共同處理血管內(nèi)皮細胞后,細胞培養(yǎng)上清中IL-6、TNF-α蛋白表達水平的變化。Western blot結(jié)果表明Apo CIII促進血管內(nèi)皮細胞中ERK1/2和p38 MAPK的磷酸化;ELISA檢測結(jié)果表明ERK1/2抑制劑與p38 MAPK抑制劑處理血管內(nèi)皮細胞后,IL-6和TNF-α蛋白表達水平均降低。這些結(jié)果為進一步解析Apo CIII引發(fā)血管內(nèi)皮細胞炎癥反應的作用機制提供了理論依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：ApoCIII 豬 血管內(nèi)皮細胞 炎癥反應 分子通路
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S858.28
【目錄】：

• 摘要5-7
• abstract7-13
• 引言13-14
• 第一篇 文獻綜述14-25
• 第1章 載脂蛋白CIII研究進展14-19
• 1 載脂蛋白CIII概述14-16
• 2 載脂蛋白CIII的生物學功能16-17
• 3 載脂蛋白CIII與相關(guān)疾病17-19
• 第2章 血管內(nèi)皮細胞19-25
• 1 血管內(nèi)皮細胞的來源19
• 2 血管內(nèi)皮細胞的功能19-21
• 3 血管內(nèi)皮細胞與炎癥21-25
• 第二篇 研究內(nèi)容25-49
• 第1章 不同濃度Apo CIII對豬主動脈血管內(nèi)皮細胞炎癥反應的影響25-34
• 1 材料與方法25-30
• 2 結(jié)果30-32
• 3 討論32-33
• 4 小結(jié)33-34
• 第2章 Apo CIII刺激豬主動脈血管內(nèi)皮細胞差異表達基因的研究34-43
• 1 材料與方法34-38
• 2 結(jié)果38-41
• 3 討論41-42
• 4 小結(jié)42-43
• 第3章 MAPK信號通路在Apo CIII引發(fā)炎癥反應中的關(guān)鍵作用43-49
• 1 材料與方法43-46
• 2 結(jié)果46-47
• 3 討論47-48
• 4 小結(jié)48-49
• 結(jié)論49-50
• 參考文獻50-60
• 導師簡介60-61
• 作者簡介61-62
• 致謝62

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4 劉s，

本文編號：1089839