本文關(guān)鍵詞：豬鏈球菌的分離鑒定及1910RR蛋白多克隆抗血清的制備

  更多相關(guān)文章： 豬鏈球菌 分離鑒定 藥敏試驗 1910RR蛋白 多克隆抗體

【摘要】：豬鏈球菌是一種重要的病原菌,對人和獸都具有致病性,豬感染鏈球菌會出現(xiàn)腦膜炎,敗血癥,心內(nèi)膜炎,關(guān)節(jié)炎等,人感染鏈球菌會出現(xiàn)胸膜炎,敗血癥,甚至?xí)劳?不但導(dǎo)致了養(yǎng)殖業(yè)巨大的經(jīng)濟(jì)損失,并引起了很大的公共健康問題。豬鏈球菌的血清型按照莢膜多糖抗原的差別可以分為35個。致病性血清型有1型,1/2型,2型,7型,9型和14型,其中2型菌株的致病性最強(qiáng),流行最為廣泛,所以被認(rèn)為是研究鏈球菌的代表。為了鑒定導(dǎo)致湖北省地區(qū)某養(yǎng)豬場豬只急性死亡的致病菌,并控制該豬場病情,試驗采用PCR方法對菌株進(jìn)行鑒定與分型,再對分離菌進(jìn)行藥敏試驗和致病性試驗。由于鑒定出來的菌株并非2型,不適合作為研究所用的代表菌株,所以只好引入標(biāo)準(zhǔn)2型菌株,并對其一對雙組份調(diào)控系統(tǒng)1910HK/RR中的1910RR蛋白做了相關(guān)研究。所做工作報道如下：(1)豬鏈球菌的臨床分離和耐藥性試驗采取患病豬的心包積液和肺組織各3份被采集作為病理材料,在5%血清的胰蛋白大豆瓊脂培養(yǎng)基上劃線接種,進(jìn)行菌落形態(tài)和革蘭氏染色的觀察。采用豬鏈球菌通用引物鑒定其為豬鏈球菌,再采用型特異性引物來確定它的血清型。為了確定有效的藥物進(jìn)行治療對其進(jìn)行了藥敏實驗,為了檢驗其致病性對小鼠進(jìn)行攻毒試驗。試驗結(jié)果表明：該病原菌為豬鏈球菌,但是血清型為除1型,2型,7型,9型以外的其他型。頭孢菌素、青霉素、氨卞西林、氯霉素、利福平、萬古霉素、阿莫西林、氧氟沙星、左氧氟沙星等高度抑制該菌的生長,環(huán)丙沙星,恩諾沙星、復(fù)方新諾明、四環(huán)素中度抑制該菌的生長,而多黏霉素B、磺胺甲基異惡唑、林可霉素等沒有抑制效果。同時該菌的致病性較強(qiáng),可導(dǎo)致小鼠死亡。這說明該豬場致病菌為豬鏈球菌,且可使用頭孢菌素和青霉素等藥物進(jìn)行治療。(2)1910RR蛋白多克隆抗體的制備PCR擴(kuò)增的1910rr基因與表達(dá)質(zhì)粒pET30aBamHI/HindIII雙酶切后,以T4連接酶連接,構(gòu)建表達(dá)載體pET30a-1910rr,酶切和測序鑒定正確后,運用化學(xué)轉(zhuǎn)化法將其導(dǎo)入大腸桿菌BL21進(jìn)行表達(dá)。通過改變誘導(dǎo)時間和IPTG濃度,降低誘導(dǎo)的溫度,確定了pET30a-1910RR融合蛋白表達(dá)的最佳條件。以六聯(lián)組氨酸鎳柱吸附融合蛋白,用不同濃度的咪唑進(jìn)行洗脫,以此確定蛋白洗脫的最佳咪唑濃度。洗脫下的蛋白采用TE透析液透析,除去咪唑等小分子雜質(zhì)后得到較純的蛋白。測量蛋白質(zhì)濃度,再用蔗糖隔著透析袋吸附其中的水分以提高濃度。純化后的1910RR蛋白對日本大耳兔進(jìn)行皮下免疫,2周一次,共免疫四次,第三次和第四次免疫時劑量增加。三次免疫后用Western blot檢測1910RR蛋白的免疫學(xué)活性,四免后以瓊脂擴(kuò)散實驗測定所制備的1910RR多克隆抗體效價。結(jié)果表明：構(gòu)建的質(zhì)粒pET30a-1910rr酶切與測序鑒定正確。融合蛋白成功的在上清中表達(dá),純化效果較好。免疫印跡檢測證實了血清中1910RR蛋白多克隆抗體的存在。瓊脂擴(kuò)散實驗測定了所制備的1910RR蛋白多克隆抗體的效價。本研究從送檢的病死豬的心包積液、肺等病理材料中成功分離到致病性豬鏈球菌,確定了病因,而對分離菌進(jìn)行的藥敏試驗確定了治療藥物,對控制該豬場病情做出了貢獻(xiàn)；同時通過原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)了豬鏈球菌2型反應(yīng)調(diào)控蛋白1910RR,制備了兔抗1910RR蛋白多克隆抗體,為運用CHIP-Seq技術(shù)研究雙組分調(diào)控系統(tǒng)1910HK/RR與受調(diào)控基因的作用方式,并獲得與1910RR蛋白相互作用的DNA序列及核心位點奠定物質(zhì)基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：豬鏈球菌 分離鑒定 藥敏試驗 1910RR蛋白 多克隆抗體
【學(xué)位授予單位】：長江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S852.611
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-8
• 英文縮寫詞表8-10
• 第一章 文獻(xiàn)綜述10-23
• 1.1 豬鏈球菌的病原學(xué)與流行病學(xué)10
• 1.2 臨床癥狀與病理變化10-11
• 1.3 細(xì)菌鑒定11-15
• 1.4 豬鏈球菌致病機(jī)制研究進(jìn)展15-20
• 1.5 耐藥機(jī)制研究進(jìn)展20-21
• 1.6 豬鏈球菌疫苗研究進(jìn)展21-22
• 1.7 研究的目的與意義22-23
• 第二章 豬鏈球菌的分離鑒定與藥敏試驗23-31
• 2.1 材料與方法23-25
• 2.2 結(jié)果25-29
• 2.3 小結(jié)與討論29-31
• 第三章 豬鏈球菌1910RR蛋白多克隆抗體的制備31-45
• 3.1 材料與方法31-39
• 3.2 結(jié)果與分析39-44
• 3.3 小結(jié)與討論44-45
• 第四章 討論與結(jié)論45-47
• 4.1 討論45-46
• 4.2 結(jié)論46-47
• 致謝47-48
• 參考文獻(xiàn)48-57
• 個人簡介57-58

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 朱鳳才,楊華富,胡曉抒,汪華,王廣和,宋亞軍,楊瑞馥;人源和豬源豬鏈球菌的同源性研究[J];中華流行病學(xué)雜志;2000年06期

2 唐文淵 ,Zygmunt Pejsak;豬鏈球菌是一種條件性病原菌[J];國外畜牧學(xué)(豬與禽);2005年04期

3 查紅波;2型豬鏈球菌研究進(jìn)展[J];江西飼料;2005年04期

4 許青華;重新認(rèn)識豬鏈球菌[J];畜牧獸醫(yī)科技信息;2005年09期

5 劉華;喻華;周忠華;顏英俊;黃文方;;致生豬疫情的豬鏈球菌檢測結(jié)果分析[J];中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志;2006年01期

6 崔正瀛;李學(xué)瑞;柳紀(jì)省;;2型豬鏈球菌的分子生物學(xué)研究進(jìn)展[J];中國畜牧獸醫(yī)文摘;2006年03期

7 白昀;覃倫;龍劍明;熊毅;覃芳蕓;朱偉;郭建剛;李華明;劉棋;;豬鏈球菌9型的分離與鑒定[J];上海畜牧獸醫(yī)通訊;2007年01期

8 王福貴;龍忠臣;王海鵬;;臨床分離豬鏈球菌的藥物敏感性分析[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2007年06期

9 覃芳蕓;陳磊;潘杰;熊毅;白昀;朱偉;郭建剛;李華明;劉棋;;豬鏈球菌1型的分離與鑒定[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2007年09期

10 魯杏華;談志祥;何世成;劉道新;邱立新;范仲鑫;唐小明;鄭姣妹;;豬鏈球菌2型湖南株的分離與鑒定[J];中國獸醫(yī)雜志;2008年10期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 聶小想;崔言順;沈志強(qiáng);管宇;逄媛;劉吉山;王艷;;20株豬鏈球菌核糖體基因多態(tài)性的研究[A];首屆中國獸藥大會——獸醫(yī)生物制品學(xué)、獸醫(yī)微生物學(xué)學(xué)術(shù)論壇論文集（2008）[C];2008年

2 劉梅芬;吳志明;閆若潛;盛敏;趙明軍;拜廷陽;;豬鏈球菌種與9型豬鏈球菌二重PCR檢測方法的建立及應(yīng)用[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會小動物醫(yī)學(xué)分會第四次學(xué)術(shù)研討會、中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會獸醫(yī)外科學(xué)分會第十六次學(xué)術(shù)研討會論文集（2）[C];2009年

3 劉梅芬;吳志明;閆若潛;盛敏;趙明軍;拜廷陽;;豬鏈球菌種與9型豬鏈球菌二重PCR檢測方法的建立及應(yīng)用[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會第七屆全國會員代表大會暨第十三次學(xué)術(shù)研討會論文集（下冊）[C];2009年

4 張安定;朱偉峰;胡攀;金梅林;;豬鏈球菌分子流行病學(xué)研究[A];第三屆全國微生物資源學(xué)術(shù)暨國家微生物資源平臺運行服務(wù)研討會會議論文摘要集[C];2011年

5 何孔旺;倪艷秀;王繼春;何家惠;王偉峰;楊瑛;陸承平;林繼煌;;豬鏈球菌2型的分子流行病學(xué)研究[A];豬的重要傳染病防治研究新成果——中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會第五屆理事會第二次全體會議暨防檢疫專業(yè)委員會第7次學(xué)術(shù)交流會論文集[C];2002年

6 徐建國;鄭翰;葉長蕓;景懷琦;;豬鏈球菌的二階段致病機(jī)理假說[A];第二屆全國人畜共患病學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2008年

7 熊毅;劉棋;覃芳蕓;朱偉;徐賢坤;付薇;;廣西豬鏈球菌2型流行病學(xué)研究[A];第二屆全國人畜共患病學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2008年

8 臧瑩安;謝樂新;李家僑;龐木生;李淼;宋帥;李春玲;;表觀健康的豬肉攜帶豬鏈球菌的調(diào)查[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會獸醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)分會第三次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2012年

9 羅玲;徐滌平;劉澤文;鄭浩;汪宏才;;豬鏈球菌2型的研究進(jìn)展[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會第六屆全國會員代表大會暨第11次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2005年

10 劉春生;徐耀輝;陳陸;楊霞;王新娟;高冬生;王永生;程海衛(wèi);劉春明;王川慶;;豬鏈球菌種及1、2、7型多重PCR檢測方法的建立及應(yīng)用[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會動物傳染病學(xué)分會第四次豬病防控學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2010年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 記者 曾星;快速豬鏈球菌檢測方法問世[N];中國國門時報;2005年

2 記者 姚雷 張穎;豬鏈球菌檢測將有據(jù)可依[N];中國國門時報;2005年

3 雒慶舉;可能對“豬鏈球菌”設(shè)險嗎[N];中國保險報;2005年

4 井 韋;把四天縮短為四小時[N];中國質(zhì)量報;2005年

5 菊　文;積極應(yīng)對豬鏈球菌2型疫情[N];中國國門時報;2005年

6 記者 何成軍 見習(xí)記者 錢河山;豬鏈球菌疫情不足憂[N];甘肅經(jīng)濟(jì)日報;2005年

7 鄭靈巧;豬鏈球菌進(jìn)犯人類告訴我們什么[N];健康報;2005年

8 北京地壇醫(yī)院主任醫(yī)師 蔡皓東;豬鏈球菌又到人間作孽[N];健康報;2005年

9 記者 原國鋒;豬鏈球菌快速檢測方法通過鑒定[N];人民日報;2005年

10 逸聞;豬鏈球菌序列變異導(dǎo)致毒力增加[N];中國畜牧獸醫(yī)報;2006年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 姚新月;2型豬鏈球菌無毒株的分離鑒定與比較基因組學(xué)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

2 潘子豪;致仔豬腦膜炎新型豬鏈球菌的鑒定[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

3 方麗華;豬鏈球菌2型超氧化物歧化酶SodA與絲氨酸/蘇氨酸去磷酸酶Stp1影響細(xì)菌毒力研究[D];浙江大學(xué);2016年

4 杜斌;豬鏈球菌2型環(huán)二腺苷酸（c-di-AMP）代謝相關(guān)基因的生物學(xué)功能研究[D];上海交通大學(xué);2015年

5 高婷;tRNA修飾酶GidA調(diào)控豬鏈球菌的生長和致病性的機(jī)制研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

6 譚美芳;MsmK調(diào)控豬鏈球菌生長和致病性的研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

7 魏子貢;豬鏈球菌流行病學(xué)及其生物被膜形成機(jī)理研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

8 李學(xué)瑞;豬鏈球菌防治新技術(shù)研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2011年

9 吳全忠;豬鏈球菌2型在模型動物豚鼠體內(nèi)的動態(tài)分布及基因免疫[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2001年

10 歐瑜;豬鏈球菌2型毒力相關(guān)蛋白的檢測及其基因片段的克隆與表達(dá)[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2001年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李曉云;東北地區(qū)豬鏈球菌對大環(huán)內(nèi)酯類抗生素耐藥機(jī)制研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

2 趙煥燦;浙江省豬鏈球菌血清及分子流行病學(xué)調(diào)查[D];浙江大學(xué);2010年

3 張靜;豬鏈球菌二氫硫辛酰胺脫氫酶的生物學(xué)功能初探及串聯(lián)蛋白的免疫保護(hù)評價[D];上海交通大學(xué);2012年

4 岳修偉;上海部分地區(qū)豬鏈球菌2型流行病學(xué)調(diào)查及其耐藥性研究[D];上海交通大學(xué);2013年

5 王巍;四川地區(qū)豬鏈球菌流行調(diào)查及其病原特性研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

6 劉人峰;豬鏈球菌基因SSU05_1000功能及豬鏈球菌2型抗吞噬機(jī)制的研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

7 王丹;六種蟲媒病毒及豬鏈球菌2型檢測蛋白芯片的研制及應(yīng)用[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

8 談忠鳴;江蘇省豬鏈球菌血清2型菌株耐藥性與分子特征研究[D];東南大學(xué);2015年

9 孫亮;豬鏈球菌2型噬菌體裂解酶LyACCG的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)域及關(guān)鍵氨基酸位點鑒定[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

10 楊寶玲;2型豬鏈球菌SSU05-0474蛋白的單克隆抗體制備及抗原表位鑒定[D];沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

，

本文編號：1081685