本文關鍵詞：PD-1在乙腦病毒外周免疫逃逸過程中作用的研究

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【摘要】：日本乙型腦炎(Japanese encephalitis,JE)是由日本乙型腦炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)引起的一種人畜共患傳染病。JEV具有嗜神經(jīng)性,在外周可逃避機體的免疫防御,穿越血腦屏障到達中樞神經(jīng)系統(tǒng),感染神經(jīng)元并刺激小膠質細胞及星形膠質細胞產(chǎn)生大量的炎癥因子,暴發(fā)炎癥反應,從而致病。目前,關于JEV免疫逃逸機制的研究較少,具體機制尚不清楚。本課題組前期研究結果顯示在JEV-P3感染C57BL/6小鼠后,伴隨著CD4~+T細胞比例下降及CD4~+T細胞表面抑制性分子PD-1的表達顯著升高。基于以上研究結果,我們進一步開展了PD-1在JEV感染過程中相關功能的研究,以PD-1-/-小鼠建立了JEV-P3感染模型,對JEV感染后相關免疫細胞及免疫分子進行了研究。結果發(fā)現(xiàn):在JEV感染早期PD-1-/-小鼠CD4~+T細胞比例略有增加,逆轉了JEV感染BALB/c小鼠后CD4~+T細胞比例降低的趨勢;JEV-P3感染3天后,PD-1-/-小鼠DC表面CD274的表達顯著高于BALB/c小鼠;JEV-P3感染后PD-1-/-小鼠MDSCs及CD19~+B細胞持續(xù)分泌IL-10的時間延長。但是JEV-P3感染PD-1-/-小鼠及BALB/c小鼠后,兩者的死亡率沒有顯著差異。綜上所述:CD4~+T細胞比例的變化說明了PD-1的缺失更好地激活了免疫應答,DC表面CD274比例的升高及IL-10分泌時間的延長說明了PD-1的缺失可能會使其它免疫抑制通路抑制作用增強,使得JEV在外周仍然可以發(fā)生免疫逃逸并進入中樞神經(jīng)系統(tǒng)引起致病,因而死亡率沒有差異。該研究有助于更好的理解JEV感染過程中免疫逃逸的機制,為相關研究提供借鑒。
【關鍵詞】：免疫應答 JEV PD-1 CD274 IL-10
【學位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S852.65
【目錄】：

• 摘要7-8
• Abstract8-9
• 縮略語表（Abbreviation）9-10
• 1 文獻綜述10-26
• 1.1 乙型腦炎簡介10
• 1.2 乙型腦炎的流行病學10-12
• 1.2.1 乙型腦炎的分布與流行10-11
• 1.2.2 乙型腦炎的傳播模式11-12
• 1.3 乙型腦炎病毒的病原學特征12-16
• 1.3.1 乙型腦炎病毒的形態(tài)與結構12-13
• 1.3.2 乙型腦炎病毒的理化性質13-14
• 1.3.3 乙型腦炎病毒的復制14-15
• 1.3.4 乙型腦炎病毒的致病過程15-16
• 1.4 乙型腦炎的臨床癥狀與危害16-17
• 1.5 乙型腦炎的診斷與防控17-18
• 1.5.1 乙型腦炎的診斷17
• 1.5.2 乙型腦炎的防控17-18
• 1.6 JEV相關的免疫抑制機制簡述18-26
• 1.6.1 DC介導的免疫抑制18-19
• 1.6.2 MDSCs介導的免疫抑制19-21
• 1.6.3 抑制性分子介導的免疫抑制21-25
• 1.6.4 IL-10介導的免疫抑制25-26
• 2 目的與意義26-27
• 3 實驗材料與方法27-38
• 3.1 實驗材料27-30
• 3.1.1 病毒、細胞27
• 3.1.2 主要藥品和試劑27-28
• 3.1.3 培養(yǎng)基及其配制28
• 3.1.4 溶液及其配制28-29
• 3.1.5 實驗動物29
• 3.1.6 實驗所用手術器械29
• 3.1.7 重要儀器及設備29-30
• 3.2 實驗方法30-38
• 3.2.1 細胞的復蘇、培養(yǎng)及傳代30
• 3.2.2 JEV-P3株的擴增與滴定30-32
• 3.2.3 bmDCs細胞的制備32
• 3.2.4 脾臟CD4~+ T淋巴細胞、CD8~+ T淋巴細胞的流式分選32-33
• 3.2.5 DC-T淋巴細胞共培養(yǎng)33-34
• 3.2.6 JEV-P3感染BALB/c小鼠及PD1/- 小鼠34-35
• 3.2.7 小鼠血液單細胞懸液的制備35
• 3.2.8 小鼠脾臟單細胞懸液的制備35-36
• 3.2.9 細胞表面染色和胞內染色36-37
• 3.2.10 手術器械消毒37
• 3.2.11 實驗動物及廢物無害化處理37
• 3.2.12 流式細胞術數(shù)據(jù)分析37
• 3.2.13 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析37-38
• 4 結果與分析38-59
• 4.1 空斑試驗測定JEV-P3株病毒滴度38
• 4.2 小鼠骨髓來源樹突狀細胞的培養(yǎng)38-39
• 4.3 DC-T細胞共培養(yǎng)39-43
• 4.3.1 CD4~+ CD25~+ T細胞的變化39-41
• 4.3.2 bmDCs細胞表面CD86、CD80分子變化41-43
• 4.4 BALB/C小鼠和PD1/- 小鼠感染模型的建立43-46
• 4.5 JEV-P3感染PD1/- 小鼠及BALB/C小鼠實驗46-59
• 4.5.1 CD4~+ T細胞及其表面抑制性分子CTLA-4 的變化47-49
• 4.5.2 DC細胞表面分子CD80及CD86的變化49-51
• 4.5.3 DC細胞表面分子CD274及CD273的變化51-53
• 4.5.4 MDSCs及相關分子的變化53-55
• 4.5.5 細胞因子IL-10的變化55-57
• 4.5.6 細胞因子IL-21的變化57-59
• 5 討論59-63
• 5.1 DC表面共刺激分子的變化60-61
• 5.2 MDSCS的變化61
• 5.3 細胞因子IL-10的變化61-62
• 5.4 JEV-P3感染小鼠后相關免疫調節(jié)62-63
• 結論63-64
• 參考文獻64-79
• 致謝79-80

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本文編號：1079071