本文關鍵詞：四川部分地區(qū)副豬嗜血桿菌與豬2型鏈球菌血清流行病學調(diào)查及其二聯(lián)蜂膠滅活苗的初步研制

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【摘要】：本試驗通過采集四川各地存在呼吸道癥狀的保育豬的血清(未注射副豬嗜血桿菌與豬2型鏈球菌疫苗),旨在對近年來嚴重影響我國養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的副豬嗜血桿菌病與豬2型鏈球菌病的血清流行病學情況進行調(diào)查,為預防和控制副豬嗜血桿菌(Hps)病與豬2型鏈球菌病提供一定的流行病學依據(jù)。將篩選出的副豬嗜血桿菌5型(Hps 5型)與豬2型鏈球菌(Ss2)疫苗菌株制備成二聯(lián)蜂膠滅活苗,并進行免疫抗體及免疫保護力評價實驗。結(jié)果如下：1.副豬嗜血桿菌與豬2型鏈球菌血清流行病學調(diào)查本試驗采用ELISA檢測試劑盒對2015年2月至2016年1月從四川多地采集的180份保育豬血清進行抗體檢測。其中,Hps抗體陽性率為55.6%(100/180)；西昌、綿陽、成都、眉山等地感染率較高,分別為85.7%(6/7)、83.0%(44/53)、77.8%(14/18)、66.7%(4/6)。Ss2血清抗體陽性率為29.4%(53/180)；阿壩、雅安、宜賓等地感染率較高,分別為54.2%(13/24)、50%(4/8)、48.7%(19/39)；Hps與Ss2混合感染百分率為17.2%(31/180)。表明四川地區(qū)Hps與Ss2混合感染情況較為明顯。2.疫苗株的篩選通過對11株Hps 5型菌株進行毒力及免疫原性比較試驗,確定疫苗菌株為82號,編號Hps82；通過對17株Ss2進行毒力及免疫原性比較試驗,確定疫苗菌株為PZ903,編號Ss903。3.Hps與Ss2二聯(lián)蜂膠滅活苗的初步研制滅活疫苗株Hps82與Ss903菌株的最佳甲醛滅活濃度確定為0.1%,滅活時間均為24 h。制備的Hps 5型與Ss2二聯(lián)蜂膠滅活苗中Hps82含菌量為4.0×109CFU/ml,Ss903含菌量為2.0×109 CFU/ml。制備的滅活苗經(jīng)皮下免疫試驗小鼠兩次(一免后一周二免),在小鼠上能產(chǎn)生良好的免疫保護力,同時能在4℃至少保存3個月。4.二聯(lián)蜂膠滅活苗與市售疫苗的對比試驗將制備的Hps5型與Ss2二聯(lián)蜂膠滅活苗與市售Hps滅活疫苗(中牧生物科技有限公司)和市售Ss2滅活疫苗(廣東永順生物制藥股份有限公司)分別免疫小鼠進行比較,結(jié)果顯示：制備的二聯(lián)蜂膠滅活苗在小鼠上的保護效果與市售Hps疫苗和Ss2疫苗基本相當,且本試驗制備的Hps與Ss2二聯(lián)蜂膠滅活苗可以減少免疫次數(shù)帶來的應激反應。
【關鍵詞】：副豬嗜血桿菌 豬2型鏈球菌 血清 二聯(lián)蜂膠滅活苗
【學位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S858.28
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-12
• 第一章 文獻綜述12-19
• 1 Hps病研究現(xiàn)狀12-13
• 1.1 病原學12
• 1.2 流行病學12-13
• 1.3 臨床癥狀與病理變化13
• 2 鏈球菌的研究現(xiàn)狀13-15
• 2.1 病原學13-14
• 2.2 流行病學14-15
• 2.3 臨床癥狀及病理變化15
• 3 蜂膠佐劑研究現(xiàn)狀15-17
• 4 疫苗候選株血清型的選擇17
• 5 研究目標與意義17-19
• 第二章 四川部分地區(qū)副豬嗜血桿菌與豬2型鏈球菌血清流行病學調(diào)查19-27
• 1 材料19
• 1.1 血清來源19
• 1.2 試劑19
• 1.3 設備19
• 2 方法19-21
• 2.1 血清樣品采集19
• 2.2 ELISA操作步驟19-21
• 2.2.1 Hps ELISA檢測方法20
• 2.2.2 Ss2 ELISA檢測方法20-21
• 3 結(jié)果21-25
• 3.1 四川部分地區(qū)Hps病血清流行病學調(diào)查結(jié)果21-22
• 3.2 不同季節(jié)Hps抗體檢測結(jié)果22-23
• 3.3 四川部分地區(qū)Ss2病血清流行病學調(diào)查結(jié)果23
• 3.4 不同季節(jié)Ss2抗體檢測結(jié)果23-24
• 3.5 Hps與Ss2混合感染抗體檢測結(jié)果24-25
• 4 討論25-26
• 5 小結(jié)26-27
• 第三章 副豬嗜血桿菌與豬2型鏈球菌疫苗菌株的篩選27-39
• 1 材料27-30
• 1.1 菌株來源27
• 1.2 實驗儀器27-28
• 1.3 試驗試劑28
• 1.4 實驗動物28-29
• 1.5 PCR引物及擴增條件29
• 1.6 主要培養(yǎng)基和溶液的配置29-30
• 2 方法30-32
• 2.1 疫苗菌株的篩選30
• 2.1.1 Hps 5型疫苗株的篩選30
• 2.1.2 Ss2疫苗株的篩選30
• 2.2 疫苗株生長曲線的測定30-31
• 2.2.1 Hps疫苗菌株生長曲線測定30-31
• 2.2.2 Ss2疫苗菌株生長曲線測定31
• 2.3 疫苗菌株平板計數(shù)31-32
• 2.3.1 Hps疫苗菌株平板菌落計數(shù)31
• 2.3.2 Ss2疫苗菌株平板菌落計數(shù)31-32
• 2.4 攻毒菌株LD_(50)測定32
• 2.4.1 Hps攻毒菌株LD_(50)測定32
• 2.4.2 Ss2攻毒菌株LD_(50)測定32
• 3 結(jié)果32-37
• 3.1 Hps 5型疫苗株的篩選結(jié)果32-33
• 3.2 Ss2疫苗菌株的篩選結(jié)果33-34
• 3.3 疫苗菌株Hps82菌株生長曲線測定結(jié)果34-35
• 3.4 疫苗菌株Hps82菌株平板菌落計數(shù)結(jié)果35
• 3.5 攻毒菌株Hps40 LD_(50)測定結(jié)果35-36
• 3.6 Ss903疫苗菌株生長曲線測定結(jié)果36
• 3.7 疫苗菌株Ss903菌株平板菌落計數(shù)結(jié)果36-37
• 3.8 Ss101菌株LD_(50)測定結(jié)果37
• 4 討論37-38
• 5 小結(jié)38-39
• 第四章 副豬嗜血桿菌與豬2型二聯(lián)蜂膠滅活苗的初步研制39-50
• 1 材料39-40
• 1.1 試驗菌株39
• 1.2 試驗動物及試劑盒39
• 1.3 疫苗來源39
• 1.4 主要藥品及配制方法39-40
• 1.5 試驗所需的儀器40
• 2 方法40-44
• 2.1 二聯(lián)蜂膠滅活苗的制備40-41
• 2.1.1 細菌的培養(yǎng)40-41
• 2.1.2 細菌滅活條件的選擇41
• 2.1.3 滅活菌液制備41
• 2.1.4 蜂膠佐劑的制備和干物質(zhì)含量測定41
• 2.1.5 二聯(lián)疫苗的合成41
• 2.2 二聯(lián)蜂膠滅活疫苗性能檢測41-43
• 2.2.1 無菌試驗41-42
• 2.2.2 最佳免疫途徑試驗42
• 2.2.3 二聯(lián)蜂膠滅活苗免疫次數(shù)優(yōu)化42
• 2.2.4 二聯(lián)蜂膠滅活苗保護效力測定42
• 2.2.5 二聯(lián)蜂膠滅活苗保護時間測定42-43
• 2.2.6 二聯(lián)蜂膠滅活苗保存時間試驗43
• 2.3 二聯(lián)蜂膠滅活苗與市售Hps與Ss疫苗的對比43-44
• 3 結(jié)果44-49
• 3.1 疫苗株Hps82與Ss903的甲醛滅活條件的選擇結(jié)果44
• 3.2 蜂膠干物質(zhì)含量的測定結(jié)果44
• 3.3 無菌試驗結(jié)果44
• 3.4 最佳免疫途徑試驗結(jié)果44-45
• 3.5 二聯(lián)蜂膠滅活苗的免疫次數(shù)優(yōu)化結(jié)果45
• 3.6 二聯(lián)蜂膠滅活苗免疫保護試驗結(jié)果45-46
• 3.7 二聯(lián)蜂膠滅活苗保護時間試驗結(jié)果46
• 3.8 二聯(lián)蜂膠滅活苗保存時間試驗結(jié)果46-47
• 3.9 二聯(lián)蜂膠滅活苗與市售Hps與Ss2疫苗的對比試驗結(jié)果47-49
• 4 討論49
• 4.1 免疫途徑及免疫次數(shù)試驗49
• 4.2 二聯(lián)蜂膠滅活苗與市售疫苗的對比49
• 5 小結(jié)49-50
• 第五章 結(jié)論50-51
• 參考文獻51-56
• 致謝56-57
• 附錄57-62

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