本文關(guān)鍵詞：FAK信號(hào)通路調(diào)控豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞遷移和粘附的分子機(jī)制

  更多相關(guān)文章： FAK 豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞 細(xì)胞遷移 粘著斑 F-肌動(dòng)蛋白

【摘要】：為研究不同品種豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞遷移和粘附差異的分子機(jī)制,本試驗(yàn)以華南地方品種藍(lán)塘豬和外來(lái)品種長(zhǎng)白豬背最長(zhǎng)肌的骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞為試驗(yàn)材料,利用細(xì)胞劃痕試驗(yàn)和transwell小室遷移試驗(yàn),比較兩品種豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的遷移能力;細(xì)胞外基質(zhì)(Fn)-細(xì)胞粘附試驗(yàn),比較兩品種豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的粘附能力;運(yùn)用細(xì)胞免疫熒光技術(shù),檢測(cè)兩品種豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞粘著斑和F-肌動(dòng)蛋白的表達(dá);采用Western blot技術(shù),檢測(cè)兩種衛(wèi)星細(xì)胞遷移24 h和粘附2 h時(shí)間點(diǎn)FAK/paxillin信號(hào)通路的蛋白表達(dá)情況,結(jié)合實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)兩種衛(wèi)星細(xì)胞粘附2 h時(shí)整合素(ITGB)關(guān)鍵基因的表達(dá);同時(shí)以藍(lán)塘豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞為材料,選用p-FAK特異性抑制劑PF-573228,分別以0、5和10μmol/L濃度處理藍(lán)塘豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞24 h,檢測(cè)其對(duì)衛(wèi)星細(xì)胞遷移和粘附的影響,以及粘著斑、F-肌動(dòng)蛋白和FAK信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)變化。試驗(yàn)結(jié)果如下:(1)細(xì)胞劃痕試驗(yàn)和transwell小室遷移試驗(yàn)表明,藍(lán)塘豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的遷移能力顯著強(qiáng)于長(zhǎng)白豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞(P0.05);細(xì)胞外基質(zhì)-細(xì)胞粘附試驗(yàn)表明,藍(lán)塘豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的粘附能力顯著強(qiáng)于長(zhǎng)白豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞(P0.05)。(2)細(xì)胞免疫熒光結(jié)果表明,相比于長(zhǎng)白豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞,藍(lán)塘豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的粘著斑表達(dá)更豐富,而F-肌動(dòng)蛋白的表達(dá)量更低。(3)藍(lán)塘豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞在遷移24 h的p-FAK(Tyr397)和p-paxillin(Tyr118)蛋白表達(dá)顯著高于長(zhǎng)白豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞(P0.05);藍(lán)塘豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞在粘附2 h的p-FAK(Tyr397),p-paxillin(Tyr118)和p-Akt(Ser473)蛋白表達(dá)顯著高于長(zhǎng)白豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞(P0.05),粘附基因ITGB3存在差異的趨勢(shì)(P=0.053)。(4)以10μmol/L PF573228濃度處理藍(lán)塘豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞24 h,能顯著抑制p-FAK(Tyr397)的蛋白表達(dá);且5和10μmol/L PF-573228處理能顯著抑制骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的遷移能力(P0.05),骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞在10μmol/L PF-573228處理濃度下,細(xì)胞粘附能力受到抑制(P0.05)。(5)與對(duì)照組相比,PF-573228以5和10μmol/L濃度處理衛(wèi)星細(xì)胞能降低粘著斑的數(shù)量,抑制p-paxillin(Tyr118)和p-Akt(Ser473)的蛋白表達(dá)(P0.05),不影響F-肌動(dòng)蛋白的變化。以上結(jié)果說(shuō)明:藍(lán)塘豬和長(zhǎng)白豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞遷移和粘附的差異與粘著斑和F-肌動(dòng)蛋白的形成密切相關(guān),FAK/paxillin信號(hào)通路可能參與兩品種骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞遷移和粘附差異的調(diào)控。
【關(guān)鍵詞】：FAK 豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞 細(xì)胞遷移 粘著斑 F-肌動(dòng)蛋白
【學(xué)位授予單位】：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S828
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-7
• 縮寫詞表7-10
• 1 前言10-13
• 2 材料與方法13-27
• 2.1 主要設(shè)備13
• 2.2 試劑與用品13-16
• 2.2.1 試劑13-14
• 2.2.2 主要試驗(yàn)用品耗材14
• 2.2.3 試驗(yàn)用品的清洗與消毒14
• 2.2.4 主要試劑的配制14-16
• 2.3 細(xì)胞模型16
• 2.4 試驗(yàn)方法16-26
• 2.4.1 藍(lán)塘豬和長(zhǎng)白豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞分離和鑒定16-17
• 2.4.2 藍(lán)塘豬和長(zhǎng)白豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞培養(yǎng)和傳代17
• 2.4.3 豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞遷移和粘附能力測(cè)定17-18
• 2.4.4 細(xì)胞免疫熒光18
• 2.4.5 F-肌動(dòng)蛋白染色18-19
• 2.4.6 抑制劑添加試驗(yàn)19
• 2.4.7 總RNA抽提、DNase I消化、CDNA反轉(zhuǎn)錄和基因芯片試驗(yàn)19-23
• 2.4.8 Western blot檢測(cè)目的蛋白23-26
• 2.5 數(shù)據(jù)處理26-27
• 3 結(jié)果與分析27-34
• 3.1 藍(lán)塘豬和長(zhǎng)白豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的鑒定27
• 3.2 總RNA樣品的質(zhì)量檢測(cè)27-28
• 3.3 藍(lán)塘豬和長(zhǎng)白豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞遷移能力比較28-29
• 3.4 藍(lán)塘豬和長(zhǎng)白豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞粘附能力比較29
• 3.5 細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)衛(wèi)星細(xì)胞F-肌動(dòng)蛋白和粘著斑29-30
• 3.6 衛(wèi)星細(xì)胞遷移 24 h時(shí)FAK信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白表達(dá)30
• 3.7 衛(wèi)星細(xì)胞粘附 2 h時(shí)FAK信號(hào)通路關(guān)鍵基因表達(dá)30-31
• 3.8 p-FAK抑制劑PF-573228處理對(duì)衛(wèi)星細(xì)胞遷移和粘附的影響31-33
• 3.9 p-FAK抑制劑PF-573228處理對(duì)FAK下游信號(hào)的影響33-34
• 4 討論34-38
• 4.1 豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞遷移和粘附34
• 4.2 FAK/paxillin信號(hào)通路調(diào)控豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞遷移34-35
• 4.3 Integrin/ FAK/paxillin信號(hào)通路調(diào)控豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的粘附35-36
• 4.4 豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞骨架與粘著斑36
• 4.5 FAK信號(hào)通路參與骨骼肌發(fā)育36-37
• 4.6 PF-573228抑制劑對(duì)豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞遷移和粘附的影響37-38
• 5 結(jié)論38-39
• 致謝39-40
• 參考文獻(xiàn)40-44
• 附錄44

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 馬喜山;豬骨骼肌發(fā)育相關(guān)基因的差異表達(dá)和多態(tài)性研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2011年

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本文編號(hào)：1060620