本文關(guān)鍵詞：對我國2012～2015年部分地區(qū)雞AIV H9N2流行株的流行變異及抗原性研究

  更多相關(guān)文章： AIV H9N2 流行變異 抗原性 免疫保護(hù)

【摘要】：中國大陸于1994年在廣東省首次報道并分離得到H9N2亞型禽流感病毒,隨后該亞型病毒廣泛傳播至我國大部分省區(qū)。近年來,關(guān)于H9N2亞型禽流感病毒的分離報道呈持續(xù)上升態(tài)勢,該病的流行每年都給我國養(yǎng)禽業(yè)帶來巨大經(jīng)濟(jì)損失。同時H9N2亞型禽流感病毒還可以為新出現(xiàn)感染人的H7N9、H10N8亞型禽流感病毒提供內(nèi)部基因,潛在威脅人類健康安全,具有重要的經(jīng)濟(jì)和公共衛(wèi)生意義。為弄清H9N2病毒在我國的流行變異情況,本研究對2012~2015年分離到的42株H9N2亞型AIV進(jìn)行全基因組測序和遺傳進(jìn)化樹構(gòu)建,并選取其中的18株代表株制備單因子血清,進(jìn)行交叉HI試驗,以此來研究H9N2流行株之間的抗原性分化情況,最后用免疫保護(hù)實驗,評價毒株Ck/GX/SIC6/13對流行株的免疫保護(hù)效果。遺傳進(jìn)化分析表明:42株H9N2病毒均屬于Ck/Bei-like分支(h9.4.2),其中97.6%(41/42)的分離株屬于h9.4.2.5亞分支,2.4%(1/42)的分離株屬于h9.4.2.6亞分支,其HA基因之間的核苷酸相似性為86.7%~99.7%,與經(jīng)典疫苗株的相似性為88.6%~92.6%。分離株形成4種不同的重組基因型(S,U,V,W),基因型S是流行的主基因型,占研究毒株的92.8%(39/42);基因型V、W為新重組基因型,其中基因型V和基因型W分別整合了來源于G9-like譜系的NA基因和wild waterfowl-like譜系的PB2基因,使H9N2病毒的基因重組現(xiàn)象愈加復(fù)雜化。特定氨基酸位點(diǎn)分析表明:所有分離株的HA蛋白裂解位點(diǎn)有兩種模式,分別為PSRSSR↓GLF(97.6%,41/42)和PARSSR↓GLF(2.4%,1/42),沒有多個連續(xù)堿性氨基酸插入,均符合低致病性禽流感病毒的分子特征。部分毒株的HA受體結(jié)合位點(diǎn)模式與人流感病毒受體結(jié)合位點(diǎn)類似,92.8%(39/42)的毒株在HA蛋白上出現(xiàn)了與哺乳動物適應(yīng)性相關(guān)的Q226→L突變;95.2%(40/42)的病毒在NA莖部出現(xiàn)了與毒力增強(qiáng)相關(guān)的63-65位點(diǎn)三個氨基酸缺失;97.6%(41/42)的毒株M2蛋白發(fā)生了與金剛烷等藥物耐藥性相關(guān)的S31→N突變;本研究分離株中僅有2.4%(1/42)的毒株在PB2基因中出現(xiàn)E627→K,沒有D701→N突變出現(xiàn)。交叉HI試驗結(jié)果表明:18株新分離株單因子抗血清對于相同和不同病毒抗原的HI效價差異為0~9 log2,它們之間的抗原相關(guān)性R值為0.41~1,說明即使來源同一分支的H9N2亞型AIV,其抗原性也正在逐漸分化,抗原性差異各異的流行株同時存在給該病的防控帶來困難。本研究根據(jù)遺傳進(jìn)化樹和交叉HI實驗結(jié)果,將18株新分離株分為3個抗原群(A、B、C),結(jié)合HA基因進(jìn)化分支和毒株分離時間及地點(diǎn)等因素,3個抗原群的出現(xiàn)大致呈現(xiàn)出A→B→C的先后關(guān)系。免疫保護(hù)實驗表明:H9N2早期分離株制備的滅活疫苗對現(xiàn)今H9N2流行毒株不能起到有效保護(hù),對A群病毒的保護(hù)率僅為30%~50%;毒株Ck/GX/SIC6/13制備的滅活疫苗也只能保護(hù)本毒株的攻毒,保護(hù)率為90%,而對其余毒株的保護(hù)效果均不理想,提示近年H9N2流行毒株的流行變異較為頻繁,流行株之間的抗原性復(fù)雜、交叉保護(hù)力差。
【關(guān)鍵詞】：AIV H9N2 流行變異 抗原性 免疫保護(hù)
【學(xué)位授予單位】：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S852.65
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-7
• 英文縮略詞7-12
• 1 引言12-16
• 1.1 禽流感概述12
• 1.2 AIV H9N2亞型在我國的流行情況12-13
• 1.3 AIV H9N2亞型基因重組現(xiàn)狀13-14
• 1.4 AIV H9N2亞型的疫苗防控14
• 1.5 潛在的公共衛(wèi)生風(fēng)險14-15
• 1.6 本研究的目的意義15-16
• 2 材料與方法16-23
• 2.1 材料16-18
• 2.1.1 相關(guān)試劑16
• 2.1.2 雞胚及實驗動物16
• 2.1.3 主要儀器16
• 2.1.4 生物信息學(xué)軟件16
• 2.1.5 毒株16-18
• 2.2 病毒的分離鑒定與RT-PCR擴(kuò)增18-20
• 2.2.1 病毒的分離18
• 2.2.2 病毒的鑒定和純化18
• 2.2.3 病毒RNA的抽提18-19
• 2.2.4 RT-PCR擴(kuò)增引物19
• 2.2.5 各基因片段一步法RT-PCR擴(kuò)增19-20
• 2.2.6 PCR產(chǎn)物的回收和純化20
• 2.3 H9N2亞型AIV全基因組測定及遺傳進(jìn)化分析20-21
• 2.3.1 全基因組測序20
• 2.3.2 序列拼接和遺傳演化分析20-21
• 2.3.3 基因型劃分21
• 2.4 H9N2亞型AIV分離株抗原性分析21-22
• 2.4.1 H9N2亞型AIV滅活油乳劑疫苗的制備21
• 2.4.2 單因子血清的制備21
• 2.4.3 不同毒株間的抗原交叉反應(yīng)測定21
• 2.4.4 抗原性差異分析21-22
• 2.5 免疫保護(hù)實驗22-23
• 2.5.1 病毒半數(shù)雞胚感染量（EID50）的測定22
• 2.5.2 AIV H9N2亞型排毒規(guī)律的研究22
• 2.5.3 毒株Ck/GX/SIC6/13的免疫保護(hù)效果評價22-23
• 3 結(jié)果與分析23-54
• 3.1 H9N2亞型AIV的流行分布情況23-25
• 3.2 HA基因25-32
• 3.2.1 HA基因遺傳進(jìn)化分析25
• 3.2.2 HA基因核苷酸序列分析及相似性比較25
• 3.2.3 HA蛋白氨基酸序列及特定氨基酸位點(diǎn)分析25-32
• 3.3 NA基因32-40
• 3.3.1 NA基因遺傳進(jìn)化分析32
• 3.3.2 NA基因核苷酸序列分析及相似性比較32
• 3.3.3 NA蛋白氨基酸序列及特定氨基酸位點(diǎn)分析32-40
• 3.4 內(nèi)部基因40-45
• 3.4.1 PB2基因遺傳進(jìn)化分析40
• 3.4.2 PB1基因遺傳進(jìn)化分析40
• 3.4.3 PA基因遺傳進(jìn)化分析40
• 3.4.4 NP基因遺傳進(jìn)化分析40
• 3.4.5 M基因遺傳進(jìn)化分析40-41
• 3.4.6 NS基因遺傳進(jìn)化分析41
• 3.4.7 內(nèi)部基因上特定氨基酸位點(diǎn)分析41-45
• 3.5 重組基因型劃分結(jié)果45-47
• 3.6 抗原性分析結(jié)果47-52
• 3.7 免疫保護(hù)實驗結(jié)果52-54
• 3.7.1 H9N2亞型AIV不同攻毒方式排毒規(guī)律的研究52-53
• 3.7.2 免疫保護(hù)實驗53-54
• 4 討論54-60
• 4.1 H9N2亞型AIV的流行趨勢54
• 4.2 表面基因的變異情況54-57
• 4.2.1 HA基因裂解位點(diǎn)模式與NA基因莖部缺失54-55
• 4.2.2 HA蛋白受體結(jié)合位點(diǎn)55-56
• 4.2.3 NA蛋白紅細(xì)胞吸附位點(diǎn)和神經(jīng)氨酸酶抑制位點(diǎn)56
• 4.2.4 HA、NA蛋白潛在糖基化位點(diǎn)56-57
• 4.3 內(nèi)部基因特定氨基酸位點(diǎn)57-58
• 4.4 內(nèi)部基因的基因重組情況58
• 4.5 抗原性分析58-59
• 4.6 免疫保護(hù)實驗59-60
• 5 結(jié)論60-61
• 致謝61-62
• 參考文獻(xiàn)62-66

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 王光鋒;李舫;王洪利;;山東部分地區(qū)H9N2亞型禽流感病毒分離鑒定及HA和NA基因的遺傳進(jìn)化分析[J];動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2015年06期

2 申翰欽;吳波良;陳一珉;謝青梅;;1株重組的H5N2亞型禽流感病毒全基因組序列分析[J];中國獸醫(yī)學(xué)報;2015年05期

3 劉琳琳;張毅;郭學(xué)金;范丹丹;朱梅勝;王守春;徐守振;王建琳;畢玉海;尹燕博;;兩株不同致病力H9N2亞型禽流感病毒全基因組序列分析[J];動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2015年09期

4 黃欣梅;李銀;劉宇卓;趙冬敏;楊婧;韓凱凱;;華東地區(qū)H9N2亞型禽流感病毒HA基因的遺傳演化分析[J];江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報;2015年02期

5 李廣偉;嚴(yán)專強(qiáng);廖昌韜;薛瑜;冀君;陳峰;馬靜云;畢英佐;謝青梅;;兩廣地區(qū)2011-2012年H9N2亞型禽流感病毒的HA基因進(jìn)化分析[J];中國獸醫(yī)學(xué)報;2014年03期

6 廖明;焦培榮;亓文寶;徐成剛;;我國近階段禽流感的流行特點(diǎn)分析與防控對策建議[J];華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報;2013年04期

7 申翰欽;曾凡桂;嚴(yán)專強(qiáng);劉佳佳;覃健萍;畢英佐;李海燕;陳峰;;廣東一株重組H9N2亞型禽流感病毒的鑒定及全基因組序列分析[J];中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報;2013年08期

8 陳陸;劉守川;趙軍;王川慶;王澤霖;;不同H9N2亞型禽流感病毒分離株致病力研究及HA抗原性變異分析[J];中國農(nóng)業(yè)科學(xué);2011年24期

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本文編號：1056486