發(fā)布時(shí)間：2017-10-18 11:13

  本文關(guān)鍵詞：減毒鼠傷寒沙門(mén)菌三型分泌表達(dá)系統(tǒng)的構(gòu)建及其特性

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【摘要】：為開(kāi)發(fā)新型重組減毒鼠傷寒沙門(mén)菌口服活疫苗載體,本研究以pYA3493質(zhì)粒為基礎(chǔ),用鼠傷寒沙門(mén)菌sopE_(Nt100)基因及其啟動(dòng)子替代原有的P_(trc)啟動(dòng)子,構(gòu)建沙門(mén)菌三型分泌表達(dá)載體pYA-sopE_(Nt100);再將質(zhì)粒pYA-sopE_(Nt100)電轉(zhuǎn)入沙門(mén)菌ΔcrpΔasd SL1344,構(gòu)建減毒鼠傷寒沙門(mén)菌ΔcrpΔasd SL1344(p YA-sop E_(Nt100))三型分泌表達(dá)系統(tǒng),研究其生物學(xué)特性,進(jìn)一步將報(bào)告基因egfp克隆入sop E基因下游,構(gòu)建重組菌株ΔcrpΔasd SL1344(p YA-sop E_(Nt100)-egfp),感染Vero細(xì)胞,用Western blotting分析該系統(tǒng)遞呈外源抗原的能力。PCR、酶切及測(cè)序結(jié)果表明,減毒鼠傷寒沙門(mén)菌ΔcrpΔasd SL1344(p YA-sop E_(Nt100))三型分泌表達(dá)系統(tǒng)構(gòu)建成功;生物學(xué)特性鑒定結(jié)果表明,其血清型與親本株Δcrp SL1344及野生株SL1344保持一致;其生化特性與親本株基本相近,但與野毒株相比發(fā)生明顯變化;生長(zhǎng)速度也更為緩慢;重組菌株ΔcrpΔasd SL1344(p YA-sop E_(Nt100))的LD50較野生株SL1344降低了7.0×104倍;Western blotting結(jié)果發(fā)現(xiàn),重組菌培養(yǎng)上清中能檢測(cè)到Sop E_(Nt100)-egfp融合蛋白(37 k Da);重組菌株感染Vero細(xì)胞后,可以同時(shí)檢測(cè)到Sop E_(Nt100)-egfp融合蛋白(37 k Da)和EGFP蛋白(27 k Da)。以上結(jié)果證實(shí),本研究成功構(gòu)建了新型減毒鼠傷寒沙門(mén)菌ΔcrpΔasd(p YA-sop E_(Nt100))三型分泌表達(dá)系統(tǒng),其能夠有效遞呈外源抗原,該重組菌株有潛力作為安全、穩(wěn)定、高效表達(dá)外源基因的口服重組活疫苗載體。
【作者單位】： 河南科技大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院動(dòng)物疫病與公共衛(wèi)生重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;洛陽(yáng)職業(yè)技術(shù)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 減毒鼠傷寒沙門(mén)菌 三型分泌系統(tǒng) sop E基因 平衡致死系統(tǒng) 活疫苗載體
【正文快照】： Received:April 7,2016;Accepted:June 28,2016Supported by:National Natural Science Foundation of China(Nos.31302059,31572489),Scientific and Technological Project ofHenan Province(No.152102110078),Doctor Foundation of Henan University of Science and Techno

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