本文關(guān)鍵詞：食品和飼料中動物源性成分PCR-層析試紙條快速檢測方法及應用

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【摘要】：本研究建立了一種食品和飼料中動物源性成分PCR-層析試紙條快速檢測方法,首先提取動物源性成分DNA,然后針對物種特異性DNA序列,設(shè)計引物,并對引物進行標記,兩條引物的5′端分別標記異硫氰酸熒光素(FITC)和生物素(biotin),最后利用層析試紙條對結(jié)果進行判讀。通過將PCR與通用免疫金標層析試紙條結(jié)合,實現(xiàn)了對食品和飼料中動物源性成分的簡便、快捷、低成本、可視化的檢測。1.引物的特異性:以驢肉和鴿子肉為陽性樣品,其他動物樣品和植物樣品為陰性樣品,使用標記過的驢和鴿子引物對其進行擴增,使用本研究建立方法進行檢測。結(jié)果表明,本研究所設(shè)計的引物具有很高的特異性,能對驢和鴿子成分樣品進行有效擴增。2.絕對靈敏度:將驢和鴿子DNA 5倍倍比稀釋,使其濃度分別為100ng/μL,20 ng/μL,4 ng/μL,0.8 ng/μL,0.16 ng/μL,0.032 ng/μL,0.0064 ng/μL,0.0013 ng/μL,0.0003 ng/μL,0.0001 ng/μL and 0.00002 ng/μL,使用本研究建立方法進行檢測。結(jié)果表明,本方法絕對靈敏度達到0.0013 ng/μL。3.實際靈敏度:分別以驢肉、鴿子肉為陽性樣品,以牛肉模擬摻假樣品,將驢肉、鴿子肉與牛肉切片,60℃烘干,研磨成粉末,過18目篩篩取粉末,制備驢肉和牛肉、鴿子肉和牛肉的混合模擬樣品,以驢肉(鴿子肉)肉粉的質(zhì)量百分比(W/W)為100%,50%,25%,10%,5%,1%,0.1%,0.01%,0.001%比例混勻,提取基因組DNA,DNA濃度調(diào)至5 ng/μL,使用本研究建立方法進行檢測。結(jié)果表明,最低檢測限可達0.01%,證明了本方法對于混合樣品檢測的高靈敏度。4.加工處理樣品的實際靈敏度:將驢肉和牛肉、鴿子肉和牛肉混合樣品分別用100℃高溫2 h,油煎5 min。結(jié)果表明,經(jīng)高溫和油煎兩種方式加工處理后,最低檢測限降低為0.1%(w/w)。5.穩(wěn)定性:將未處理的0.01%驢肉和牛肉、鴿子肉和牛肉的混合樣品及高溫和油煎2種加工處理的0.1%驢肉和牛肉、鴿子肉和牛肉的混合樣品,重復20次進行最低檢測限穩(wěn)定性檢測。結(jié)果表明,20次試紙條檢測檢測線均變紅,結(jié)果均為陽性,即最低檢測限的穩(wěn)定性良好,檢出率為100%。
【關(guān)鍵詞】：動物源性成分 PCR-層析試紙條 快速檢測
【學位授予單位】：大連工業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：TS207.3;S816.17
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 第一章 前言9-17
• 1.1 研究背景9-10
• 1.2 動物源性成分檢測技術(shù)10-11
• 1.2.1 PCR-技術(shù)10
• 1.2.2 多重PCR技術(shù)10
• 1.2.3 基因芯片技術(shù)10-11
• 1.2.4 分子指紋技術(shù)11
• 1.2.5 免疫分析技術(shù)11
• 1.2.6 質(zhì)譜技術(shù)11
• 1.3 PCR-層析試紙條技術(shù)11-16
• 1.3.1 引物設(shè)計原則11-12
• 1.3.2 驢引物設(shè)計12-13
• 1.3.3 鴿子引物設(shè)計13
• 1.3.4 PCR-層析試紙條結(jié)構(gòu)13
• 1.3.5 膠體金的性質(zhì)特點13-14
• 1.3.6 膠體金顆粒與蛋白作用方式14
• 1.3.7 PCR-層析試紙條檢測原理14-15
• 1.3.8 PCR-層析試紙條的制備15
• 1.3.9 PCR-層析試紙條的優(yōu)點15-16
• 1.4 研究目的和意義16-17
• 1.4.1 研究目的16
• 1.4.2 研究意義16-17
• 第二章 材料與方法17-23
• 2.1 實驗材料17-19
• 2.1.1 實驗樣品17
• 2.1.2 主要儀器17-18
• 2.1.3 主要試劑和材18-19
• 2.2 實驗方法19-21
• 2.2.1 樣品DNA提取19-20
• 2.2.2 PCR擴增20
• 2.2.3 引物特異性試驗20
• 2.2.4 絕對靈敏度試驗20-21
• 2.2.5 實際靈敏度試驗21
• 2.2.6 加工處理樣品實際靈敏度試驗21
• 2.2.7 最低檢出限穩(wěn)定性試驗21
• 2.3 結(jié)果判讀21-23
• 第三章 結(jié)果與分析23-33
• 3.1 引物特異性試驗23-25
• 3.2 靈敏度試驗25-30
• 3.2.1 絕對靈敏度試驗25-26
• 3.2.2 實際靈敏度試驗26-28
• 3.2.3 加工處理樣品靈敏度試驗28-30
• 3.3 最低檢出限穩(wěn)定性試驗30-33
• 第四章 初步應用33-43
• 4.1 試驗材料33-34
• 4.1.1 樣品采集33-34
• 4.1.2 主要儀器和試劑材料34
• 4.2 試驗方法34-43
• 4.2.1 樣品DNA提取和PCR擴增34
• 4.2.2 特異性試驗34-35
• 4.2.3 穩(wěn)定性試驗35-43
• 第五章 結(jié)論43-44
• 參考文獻44-47
• 致謝47

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6 李Y，

本文編號：1052127