本文關(guān)鍵詞：表達(dá)小鵝瘟病毒VP2蛋白重組鴨瘟病毒的構(gòu)建及其生物學(xué)特性

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【摘要】：【目的】鴨瘟和小鵝瘟是番鴨和鵝的兩種重要傳染病,鴨瘟最主要的防治措施是定期接種鴨瘟病毒減毒活疫苗。根據(jù)2012年國(guó)際病毒分類(lèi)委員會(huì)(ICTV)的報(bào)告,DEV被歸為皰疹病毒科的α皰疹病毒亞科馬立克氏病毒屬。皰疹病毒如偽狂犬病毒、馬立克氏病毒、火雞皰疹病毒等已廣泛用于病毒活載體的研究,而近幾年也有關(guān)于鴨瘟病毒(DEV)作為疫苗活載體的報(bào)道。為了為免疫防控鴨瘟和小鵝瘟提供新手段,本研究擬在鴨瘟病毒疫苗株感染性克隆的基礎(chǔ)上,構(gòu)建表達(dá)小鵝瘟病毒(GPV)主要免疫原蛋白VP2的重組病毒rDEV-VP2,并研究其生物學(xué)特性,進(jìn)而探討重組病毒rDEV-VP2作為防治DEV和GPV的二聯(lián)重組活載體疫苗的可能性�！痉椒ā繉⒚艽a子優(yōu)化的GPV VP2基因通過(guò)常規(guī)基因克隆的方法插入轉(zhuǎn)移載體p EP-BGH-end,構(gòu)建含有GPV VP2表達(dá)框p CMV-VP2-BGH-p A的重組表達(dá)質(zhì)粒。在鴨瘟病毒(DEV)疫苗株細(xì)菌人工染色體克隆pDEV-EF1的基礎(chǔ)上,通過(guò)"Red E/T"兩步重組法將GPV VP2基因表達(dá)框插入到DEV US7和US8基因之間構(gòu)建了突變體克隆pDEV-VP2。利用磷酸鈣法轉(zhuǎn)染雞胚成纖維細(xì)胞(CEFs)拯救獲得重組病毒rDEV-VP2和刪除Bac質(zhì)粒序列的rDEV-VP2-Cre,并對(duì)重組病毒細(xì)胞體外生長(zhǎng)曲線、蝕斑大小和VP2蛋白表達(dá)情況進(jìn)行測(cè)定。將rDEV-VP2接種番鴨,在不同時(shí)間采集血清,采用間接ELISA法檢測(cè)血清中GPV VP2抗體產(chǎn)生情況�！窘Y(jié)果】間接免疫熒光檢測(cè)和Western blot分析表明,外源蛋白VP2在CEFs細(xì)胞成功表達(dá)。病毒生長(zhǎng)曲線和蝕斑大小測(cè)定結(jié)果顯示,rDEV-VP2在CEFs細(xì)胞上的增殖滴度與親本株相比無(wú)顯著差異,表明外源基因VP2的插入不影響rDEV重組病毒的增殖。動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果表明,7日齡雛番鴨接種rDEV-VP2可以誘導(dǎo)產(chǎn)生針對(duì)GPV VP2的抗體,免疫后3周抗體陽(yáng)性率為50%(4/8)�！窘Y(jié)論】將小鵝瘟病毒的主要免疫原基因VP2插入到DEV疫苗株基因組的US7和US8基因間構(gòu)建了表達(dá)該免疫原性基因的重組鴨瘟病毒細(xì)菌人工染色體,繼而在雞胚成纖維細(xì)胞(CEFs)上拯救獲得了重組病毒rDEV-VP2,病毒細(xì)胞生長(zhǎng)特性與親本株基本一致,且能誘導(dǎo)鴨體產(chǎn)生GPV VP2特異性的抗體。該研究為研制DEV-GPV二聯(lián)重組活載體疫苗奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所;
【關(guān)鍵詞】： 鴨瘟病毒 鵝細(xì)小病毒 VP 重組病毒
【基金】：浙江省科技計(jì)劃項(xiàng)目?jī)?yōu)先主題重點(diǎn)國(guó)際科技合作合作研究項(xiàng)目(2011C14011) 浙江省自然科學(xué)基金(LY15C180002) 浙江省公益技術(shù)應(yīng)用研究項(xiàng)目(2016C32070)
【分類(lèi)號(hào)】：S852.65
【正文快照】：

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本文編號(hào)：1041706