發(fā)布時(shí)間：2017-10-15 12:28

  本文關(guān)鍵詞：三種家禽病毒多重RT-LAMP檢測方法的建立與應(yīng)用

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【摘要】：LAMP檢測方法由于具有擴(kuò)增速度快、現(xiàn)場檢測的潛力而備受關(guān)注。但目前的研究多是聚焦于單重LAMP擴(kuò)增,只能進(jìn)行單個(gè)目標(biāo)的檢測。本研究首次將禽流感、新城疫和傳染性法氏囊三種病毒性疾病作為一個(gè)檢測整體,建立了對三種疫病同時(shí)進(jìn)行篩選檢測的多重RT-LAMP檢測方法。本研究首先通過減少LAMP標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系中的外引物來減少引物之間的相互干擾;其次以Calcein為核酸染料,建立了禽流感、新城疫和傳染性法氏囊三種病毒實(shí)時(shí)熒光多重反轉(zhuǎn)錄環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(multiplex real-time reverse transcription-LAMP,mRT-LAMP)檢測方法;三是對該法特異性、敏感性及準(zhǔn)確性進(jìn)行了評價(jià)。試驗(yàn)結(jié)果顯示:所建立的mRT-LAMP檢測方法可對AIV、NDV和IBDV同時(shí)進(jìn)行篩選檢測,靈敏度可達(dá)到10個(gè)基因拷貝,與單重LAMP檢測的靈敏度相當(dāng);所建立的方法特異性強(qiáng),與其他病原體無交叉反應(yīng);小規(guī)模田間試驗(yàn)顯示該法可用于三種病毒的快速篩選檢測,結(jié)果準(zhǔn)確可靠。結(jié)果表明:本實(shí)驗(yàn)建立的mRT-LAMP檢測法可滿足三種家禽病毒的快速篩選檢測需求,具有一定的應(yīng)用價(jià)值。
【作者單位】： 深圳出入境檢驗(yàn)檢疫局;深圳市檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院;中國檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院;
【關(guān)鍵詞】： 多重檢測 RT-LAMP檢測
【基金】：科技部質(zhì)檢公益項(xiàng)目(201210018)資助
【分類號】：S852.65
【正文快照】： 禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)血清亞型眾多,抗原變異性強(qiáng),宿主范圍廣泛,亞型之間交叉保護(hù)率低,使得禽流感頻繁暴發(fā),成為養(yǎng)禽業(yè)的一大毀滅性疫病〔1〕。新城疫(Newcastle disease,ND)是由副粘病毒I型病毒(Newcastle disease vi-rus,NDV)引起的一類主要感染禽類的烈性

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本文編號：1037119