發(fā)布時(shí)間：2017-10-14 05:23

  本文關(guān)鍵詞：廣東地區(qū)葡萄球菌中耐藥基因cfr的流行性研究

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【摘要】：葡萄球菌是最常見的化膿性球菌,也是醫(yī)院交叉感染的重要來源之一,可以對人類和畜牧業(yè)造成嚴(yán)重的危害。近年來隨著抗菌藥物的濫用和多重耐藥基因cfr在動(dòng)物源菌株中的廣泛傳播,致使動(dòng)物源葡萄球菌耐藥現(xiàn)狀備受關(guān)注。本論文對廣東不同地區(qū)豬場中動(dòng)物源和密切接觸者攜帶cfr的葡萄球菌的流行特征及是否存在cfr陽性菌株的克隆傳播進(jìn)行了初步研究,旨在為指導(dǎo)臨床合理應(yīng)用抗菌藥物,減緩耐藥性傳播提供一定的理論依據(jù)。2013年從豬場采集1000份豬及其密切接觸者鼻拭子和肛門拭子樣品,用甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基分離出995株革蘭氏陽性菌株,采用PCR檢測到到96株攜帶cfr的陽性菌株。采用鏡檢和MALDI-TOF-MS儀器鑒定攜帶cfr的陽性菌,檢測到36株為葡萄球菌,檢測率為3.6%(36/995)。其中,34株來源于豬,另外2株來源于人。通過PCR測定葡萄球菌的gap以及16S rRNA基因,對36株攜帶cfr葡萄球菌菌株進(jìn)行進(jìn)一步菌種鑒定。結(jié)果表明這36株主要為松鼠葡萄球菌(n=18),其次為腐生葡萄球菌(n=5),科氏葡萄球菌(n=4),阿爾萊葡萄球菌(n=3),緩慢葡萄球菌(n=1),木糖葡萄球菌(n=1),馬胃葡萄球菌(n=1),另外還檢測到1株金黃色葡萄球菌。采用瓊脂稀釋法測定36株攜帶cfr的葡萄球菌對臨床常用的12種抗菌藥物的最小抑菌濃度。結(jié)果表明,36株攜帶cfr的葡萄球菌對臨床常用的多種藥物均呈現(xiàn)出不同程度的耐藥性。耐藥率較高的依次有四環(huán)素、氨芐西林、克林霉素、頭孢噻呋以及氟苯尼考,其耐藥率依次為83.33%、77.78%、77.78%、75%以及75%。其余氯霉素、沃尼妙林、苯唑西林、紅霉素、慶大霉素以及環(huán)丙沙星的耐藥率分別為69.44%、63.89%、63.89%、52.78%、50%以及38.89%,而利奈唑胺較為敏感,其耐藥率僅為5.56%。另外,耐甲氧西林葡萄球菌共有21株,占58.33%,還發(fā)現(xiàn)1株耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌。36株攜帶cfr的葡萄球菌,有30株對3~12種受試藥物耐藥,表明多重耐藥性現(xiàn)象嚴(yán)重。采用PCR方法檢測36株攜帶cfr的葡萄球菌中其它耐藥基因,如fexA、ermA、ermB、ermC以及tetM、tetA和tetB。結(jié)果顯示在36株攜帶cfr的葡萄球菌中有23株攜帶fexA基因,未檢測到ermA、ermB、ermC、tetM、tetA及tetB基因。采用Sma-I PFGE對36株cfr陽性葡萄球菌進(jìn)行親緣關(guān)系分析。結(jié)果顯示30株分型成功,PFGE圖譜呈現(xiàn)多樣性,其中16株松鼠葡萄球菌分為12個(gè)組群(90%相似度),表明cfr陽性葡萄球菌多為為非克隆菌株,呈現(xiàn)多樣化的遺傳背景。但是,也發(fā)現(xiàn)克隆傳播菌株,如來自于同一養(yǎng)殖場的腐生葡萄球菌菌株328和371,其中菌株328來源于豬,而菌株371來源于人以及來自于不同養(yǎng)殖場松鼠葡萄球菌菌株251和283的PFGE圖譜呈現(xiàn)相似度為100%。綜上所述,我國廣東不同地區(qū)豬場中動(dòng)物源和密切接觸者中攜帶cfr葡萄球菌存在較低的流行性(3.6%),攜帶cfr葡萄球菌對苯唑西林耐藥率較高(63.89%),而對利奈唑胺耐藥率較低(5.56%),多重耐藥情況較嚴(yán)重,表明cfr陽性葡萄球菌呈現(xiàn)多樣化的遺傳背景,但也存在克隆傳播。在同一養(yǎng)殖場,人與豬之間可能存在cfr陽性菌株的克隆傳播,存在威脅人類健康的可能。
【關(guān)鍵詞】：豬場 葡萄球菌 cfr 流行特征
【學(xué)位授予單位】：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S852.611
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-7
• 縮略語7-10
• 1 前言10-14
• 1.1 葡萄球菌10-11
• 1.2 cfr基因的研究現(xiàn)狀11-12
• 1.3 PFGE在分子生物學(xué)中的應(yīng)用12-13
• 1.4 本課題的研究意義13-14
• 2 材料與方法14-31
• 2.1 材料14-17
• 2.1.1 樣品來源14
• 2.1.2 質(zhì)控菌14
• 2.1.3 藥物14
• 2.1.4 培養(yǎng)基14
• 2.1.5 主要試劑14-17
• 2.1.6 主要儀器設(shè)備17
• 2.2 方法17-31
• 2.2.1 細(xì)菌的分離17
• 2.2.2 細(xì)菌的鑒定17-20
• 2.2.3 瓊脂稀釋法測最小抑菌濃度20-22
• 2.2.4 耐藥基因的檢測及鑒定22-24
• 2.2.5 PFGE分型24-28
• 2.2.6 多位點(diǎn)序列（MLST）分型28-30
• 2.2.7 葡萄球菌蛋白A（spa）分型30-31
• 3 結(jié)果與分析31-38
• 3.1 細(xì)菌分離鑒定結(jié)果31-32
• 3.1.1 初步分離與鑒定31
• 3.1.2 PCR鑒定31-32
• 3.2 受試菌對12種抗菌藥的敏感性分析結(jié)果32-34
• 3.2.1 耐藥率32-34
• 3.2.2 受試菌株的多重耐藥情況34
• 3.3 耐藥基因的PCR擴(kuò)增及檢測結(jié)果34
• 3.4 PFGE結(jié)果34-38
• 4 討論38-44
• 4.1 葡萄球菌的分離鑒定38-39
• 4.2 葡萄球菌的耐藥性監(jiān)測39-41
• 4.3 cfr基因的流行分布41-43
• 4.4 cfr基因PFGE流行病學(xué)調(diào)查43-44
• 5 結(jié)論44-45
• 致謝45-46
• 參考文獻(xiàn)46-54
• 附錄54

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 王冰;扈慶華;張錦周;黃薇;李迎慧;石曉路;林一曼;邱亞群;;深圳市食物中毒來源金黃色葡萄球菌的分子流行病學(xué)分析[J];中國熱帶醫(yī)學(xué);2015年02期

2 孟昭倩;孫永;李國蘭;郭國俠;卜戈;張竹慧;;2010年-2013年阜陽市食源性金黃色葡萄球菌生物學(xué)及流行病學(xué)特征[J];中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志;2014年08期

3 張揚(yáng);張?zhí)m榮;周景林;金岳;羅宇馨;高翔;遲復(fù)平;張靖;趙鳳玲;王寶蘭;;2009-2011年通州區(qū)食源性金黃色葡萄球菌的生物學(xué)及流行病學(xué)特征[J];中國微生態(tài)學(xué)雜志;2013年02期

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本文編號：1029236