本文關(guān)鍵詞：葡萄糖、胰島素及地塞米松對(duì)綿羊Musclin基因啟動(dòng)子調(diào)控活性的影響

  更多相關(guān)文章： 綿羊 Musclin基因啟動(dòng)子 轉(zhuǎn)錄調(diào)控活性 葡萄糖 胰島素 地塞米松

【摘要】：Musclin是一種肌細(xì)胞因子,可以調(diào)節(jié)肌肉細(xì)胞的糖代謝過程。目前,其轉(zhuǎn)錄和表達(dá)調(diào)控機(jī)制尚未闡明,有關(guān)葡萄糖、胰島素和糖皮質(zhì)激素對(duì)Musclin啟動(dòng)子活性影響的相關(guān)研究尚未見報(bào)道。本課題組前期已經(jīng)構(gòu)建了綿羊Musclin啟動(dòng)子-報(bào)告基因(EGFP)表達(dá)載體,本試驗(yàn)旨在通過用葡萄糖、胰島素及地塞米松(人工合成的糖皮質(zhì)激素)處理轉(zhuǎn)染綿羊Musclin啟動(dòng)子-EGFP表達(dá)載體的C2C12細(xì)胞,探究這些因素對(duì)綿羊Musclin啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄調(diào)控活性的影響。用不同濃度葡萄糖(0、5、15、25、35mM)、胰島素(0、10、20、30、40nM)單獨(dú)或聯(lián)合35mM葡萄糖、地塞米松(0、10、100、1000 nM)分別處理轉(zhuǎn)染綿羊Musclin啟動(dòng)子-EGFP表達(dá)載體的C2C12細(xì)胞,然后正常培養(yǎng)(未分化狀態(tài))或誘導(dǎo)分化培養(yǎng)(分化狀態(tài))24H、48H、72H后,通過用熒光定量PCR檢測(cè)EGFP基因mRNA表達(dá)而比較綿羊Musclin啟動(dòng)子活性的變化,結(jié)果表明：1)與未分化狀態(tài)時(shí)相比,C2C12細(xì)胞分化48H后綿羊Musclin啟動(dòng)子活性顯著升高,分化72H后活性最高。2)不同濃度葡萄糖對(duì)不同時(shí)間點(diǎn)未分化和分化狀態(tài)的C2C12細(xì)胞中綿羊Musclin啟動(dòng)子的活性均具有上調(diào)作用,總體規(guī)律是35mM葡萄糖組在不同時(shí)間點(diǎn)均表現(xiàn)出較為穩(wěn)定的高幅度上調(diào)。3)無論未分化還是分化狀態(tài),正常培養(yǎng)還是高糖培養(yǎng)條件,不同濃度胰島素對(duì)C2C12細(xì)胞中綿羊Musclin啟動(dòng)子活性均具有上調(diào)作用,總體規(guī)律是40nM胰島素組在不同時(shí)間點(diǎn)均表現(xiàn)出較為穩(wěn)定的高幅度上調(diào)。4)在細(xì)胞未分化時(shí),地塞米松對(duì)綿羊Musclin啟動(dòng)子活性的影響總體表現(xiàn)出上調(diào)作用;但在細(xì)胞分化狀態(tài)時(shí),地塞米松對(duì)綿羊Musclin啟動(dòng)子活性的影響則因地塞米松劑量及細(xì)胞分化階段不同而不同。
【關(guān)鍵詞】：綿羊 Musclin基因啟動(dòng)子 轉(zhuǎn)錄調(diào)控活性 葡萄糖 胰島素 地塞米松
【學(xué)位授予單位】：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S826
【目錄】：

• 摘要7-8
• 文獻(xiàn)綜述8-13
• 1 Musclin發(fā)現(xiàn)及研究進(jìn)展8-11
• 1.1 Musclin的發(fā)現(xiàn)及功能概述8
• 1.2 Musclin基因結(jié)構(gòu)8-9
• 1.3 Musclin與機(jī)體代謝9-10
• 1.4 影響Musclin基因表達(dá)的因素10-11
• 2 Musclin基因啟動(dòng)子功能研究進(jìn)展11-13
• 本研究的立項(xiàng)依據(jù)與研究意義13-14
• 試驗(yàn)一 葡萄糖對(duì)綿羊Musclin基因啟動(dòng)子活性的影響14-34
• 1.1 材料與方法14-24
• 1.1.1 試驗(yàn)用細(xì)胞與載體14
• 1.1.2 試驗(yàn)用試劑和耗材14
• 1.1.3 引物合成和數(shù)據(jù)分析14
• 1.1.4 試驗(yàn)儀器14-15
• 1.1.5 試驗(yàn)用試劑的配制15-16
• 1.1.6 試驗(yàn)基本方法16-24
• 1.2 結(jié)果與分析24-31
• 1.2.1 Musclin基因啟動(dòng)子真核表達(dá)載體MusclinPro~W-EGFP酶切鑒定結(jié)果24-25
• 1.2.2 MusclinPro~W-EGFP在C2C12細(xì)胞中轉(zhuǎn)染效率檢測(cè)25-26
• 1.2.3 經(jīng)轉(zhuǎn)染C2C12細(xì)胞在分化與未分化狀態(tài)下EGFP mRNA的表達(dá)26-27
• 1.2.4 C2C12細(xì)胞轉(zhuǎn)染后的RNA提取結(jié)果27-28
• 1.2.5 EGFP及GAPDH基因mRNA的PCR擴(kuò)增與溶解曲線28
• 1.2.6 不同濃度葡萄糖對(duì)EGFP mRNA表達(dá)的影響28-31
• 1.3 討論31-34
• 1.3.1 分化對(duì)綿羊Musclin啟動(dòng)子活性的影響31-32
• 1.3.2 葡萄糖對(duì)綿羊Musclin啟動(dòng)子活性的影響32
• 1.3.3 轉(zhuǎn)染效率的提高32-33
• 1.3.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR的優(yōu)化33-34
• 試驗(yàn)二 胰島素和地塞米松對(duì)綿羊Musclin基因啟動(dòng)子活性的影響34-44
• 2.1 材料與方法34-36
• 2.1.1 試驗(yàn)用細(xì)胞與載體34
• 2.1.2 試驗(yàn)用試劑和耗材34
• 2.1.3 引物合成、序列分析以及數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)34
• 2.1.4 儀器與設(shè)備34
• 2.1.5 試驗(yàn)用試劑的配制34
• 2.1.6 試驗(yàn)方法34-36
• 2.2 結(jié)果與分析36-42
• 2.2.1 不同濃度胰島素對(duì)EGFP mRNA表達(dá)的影響36-40
• 2.2.2 不同濃度地塞米松對(duì)EGFP mRNA表達(dá)的影響40-42
• 2.3 討論42-44
• 2.3.1 胰島素對(duì)綿羊Musclin啟動(dòng)子活性的影響42
• 2.3.2 地塞米松對(duì)綿羊Musclin啟動(dòng)子活性的影響42-44
• 全文結(jié)論44-45
• 參考文獻(xiàn)45-49
• Abstract49-51
• 致謝51

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