發(fā)布時間：2017-10-10 14:42

  本文關(guān)鍵詞：奶牛乳腺上皮細(xì)胞miR-214靶基因的鑒定及其對免疫調(diào)節(jié)的初步研究

  更多相關(guān)文章： miR-214 奶牛乳腺上皮細(xì)胞 雙熒光素酶分析 qRT-PCR

【摘要】：miRNA是一類具有調(diào)控作用的非編碼微小RNA,其長度一般為20~25個堿基。miRNA通常通過堿基互補(bǔ)配對的方式與靶基因的3’非編碼區(qū)結(jié)合,抑制靶m RNA的表達(dá)或是蛋白的翻譯過程,從而對靶基因進(jìn)行調(diào)控。本研究通過向293A細(xì)胞系共轉(zhuǎn)染miR-214的類似物和靶基因重組雙熒光素酶報告基因載體,48h后檢測靶基因雙熒光素酶活性來初步篩選miR-214潛在的靶基因,并向奶牛乳腺上皮細(xì)胞中轉(zhuǎn)染miR-214的類似物及阻抑物,即分別對奶牛乳腺上皮細(xì)胞中的miR-214進(jìn)行過表達(dá)和干擾表達(dá),24h后提取細(xì)胞總RNA并反轉(zhuǎn)錄為cDNA,利用實(shí)時熒光定量PCR(qRT-PCR)技術(shù),檢測靶基因及其下游通路基因和炎癥因子的表達(dá)量。主要結(jié)果如下:1、轉(zhuǎn)染293A試驗中,miR-214 mimics實(shí)驗組NFATc3、TRAF3雙熒光素酶活性比轉(zhuǎn)染miR-214 mimics control的對照組極顯著降低(p0.01),TOLLIP、IGDCC3、NFATc4、IL17RD的表達(dá)量實(shí)驗組和對照組沒有顯著變化。我們推測,NFATc3、TRAF3是miR-214的靶基因。2、轉(zhuǎn)染乳腺上皮細(xì)胞試驗中,mi R-214 mimics實(shí)驗組靶基因NFATc3、TRAF3及其下游信號通路基因MAP3K14、TBK1和炎癥因子IL-6、IL-1β基因的表達(dá)量比轉(zhuǎn)染miR-214mimics control的對照組極顯著降低(p0.01),而且miR-214 inhibitor實(shí)驗組靶基因NFATc3、TRAF3及其下游信號通路基因MAP3K14、TBK1和炎癥因子IL-6、IL-1β基因的表達(dá)量比轉(zhuǎn)染miR-214 inhibitor control的對照組顯著升高(p0.05)。該研究結(jié)果證明在奶牛乳腺上皮細(xì)胞中,miR-214顯著抑制靶基因NFATc3、TRAF3的表達(dá),并間接抑制其下游信號通路基因MAP3K14、TBK1和炎癥因子IL-6、IL-1β基因的表達(dá)。綜上所述,本研究從細(xì)胞水平上探討了mi R-214在奶牛乳房炎中的作用及分子機(jī)制,研究結(jié)果為奶牛乳房炎的分子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)解析積累資料,為乳房炎抗性分子育種提供新的分子依據(jù)和科學(xué)指導(dǎo)。
【關(guān)鍵詞】：miR-214 奶牛乳腺上皮細(xì)胞 雙熒光素酶分析 qRT-PCR
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S823
【目錄】：

• 摘要6-7
• ABSTRACT7-10
• 第一章 文獻(xiàn)綜述10-17
• 1.1 miRNA的研究進(jìn)展10-12
• 1.1.1 miRNA的發(fā)現(xiàn)10
• 1.1.2 miRNA的作用機(jī)制10-11
• 1.1.3 miRNA的檢測方法11
• 1.1.4 miRNA在動物中研究進(jìn)展11-12
• 1.1.5 miRNA對奶牛乳房炎調(diào)控機(jī)制的研究12
• 1.2 miRNA靶基因的預(yù)測與鑒定12-13
• 1.2.1 生物信息學(xué)預(yù)測12-13
• 1.2.2 生物學(xué)實(shí)驗預(yù)測13
• 1.2.3 miRNA靶基因的鑒定13
• 1.3 miR-214對免疫途徑的調(diào)節(jié)及意義13-14
• 1.4 miR-214靶基因的研究進(jìn)展14-15
• 1.4.1 TRAF3的研究進(jìn)展14
• 1.4.2 NFATc3的研究進(jìn)展14-15
• 1.5 研究的目的和意義15
• 1.6 研究的技術(shù)路線15-17
• 第二章 miR-214靶基因的鑒定17-26
• 2.1 材料和方法17-21
• 2.1.1 主要試劑和試劑盒17
• 2.1.2 miR-214靶基因的預(yù)測17
• 2.1.3 構(gòu)建雙熒光素酶報告基因載體17-20
• 2.1.4 293A細(xì)胞系的轉(zhuǎn)染20
• 2.1.5 測定酶活20-21
• 2.1.6 統(tǒng)計分析21
• 2.2 結(jié)果與分析21-24
• 2.2.1 靶基因的預(yù)測21
• 2.2.2 靶基因雙熒光素酶報告基因重組載體鑒定21-23
• 2.2.3 不同靶基因與miR-214作用驗證結(jié)果23-24
• 2.3 討論24-25
• 2.4 小結(jié)25-26
• 第三章 過表達(dá)和干擾miR-214對奶牛乳腺上皮細(xì)胞的影響26-34
• 3.1 材料和方法26-29
• 3.1.1 主要試劑和試劑盒26
• 3.1.2 miR-214 mimics轉(zhuǎn)染奶牛乳腺上皮細(xì)胞26-27
• 3.1.3 miR-214 mimics對其靶基因及通路基因和炎癥因子表達(dá)的影響27-28
• 3.1.4 miR-214 inhibitor轉(zhuǎn)染奶牛乳腺上皮細(xì)胞28-29
• 3.1.5 miR-214 inhibitor對其靶基因及通路基因表達(dá)的影響29
• 3.1.6 統(tǒng)計分析29
• 3.2 結(jié)果與分析29-32
• 3.2.1 過表達(dá)和干擾表達(dá)miR-214后奶牛乳腺上皮細(xì)胞總RNA質(zhì)量檢測29-30
• 3.2.2 過表達(dá)miR-214對其靶基因及通路基因和炎癥因子表達(dá)的影響30-31
• 3.2.3 干擾表達(dá)miR-214對其靶基因及通路基因和炎癥因子表達(dá)的影響31-32
• 3.3 討論32-33
• 3.4 小結(jié)33-34
• 第四章 結(jié)論及展望34-35
• 4.1 研究結(jié)論34
• 4.2 主要創(chuàng)新點(diǎn)34
• 4.3 需要進(jìn)一步研究的問題34-35
• 參考文獻(xiàn)35-40
• 附錄40-49
• 致謝49-50
• 作者簡介50

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王月影;朱河水;王艷玲;;乳腺上皮細(xì)胞的鈣轉(zhuǎn)運(yùn)研究進(jìn)展[J];江西農(nóng)業(yè)學(xué)報;2008年06期

2 楊櫟;李鍵;吳媛媛;田甜;畢琳;梁天宇;;綠色熒光蛋白基因在牦牛乳腺上皮細(xì)胞中表達(dá)的研究[J];西南民族大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2009年03期

3 吳媛媛;李鍵;楊櫟;畢琳;田甜;;牦牛乳腺上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)的研究[J];西南民族大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2009年04期

4 弓超;王凌云;周歡敏;;牛乳腺上皮細(xì)胞體外分離和培養(yǎng)[J];動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2011年07期

5 李吉霞;葛秀國;王文秀;張涌;;牛乳腺上皮細(xì)胞的分離培養(yǎng)[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2012年07期

6 符梅;熊顯榮;高川;李宇;王樹茂;李鍵;;麥洼牦牛乳腺上皮細(xì)胞系的建立及其生物學(xué)特性[J];西北農(nóng)業(yè)學(xué)報;2012年11期

7 郝明超;劉r，

本文編號：1006956