本文關(guān)鍵詞：雞、豬、奶牛源大腸桿菌的耐藥性與其I類整合子和質(zhì)粒相關(guān)性研究

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【摘要】：致病性大腸桿菌是一種重要的人畜共患病原菌,可以引起人以及雞、豬、奶牛等多種動物發(fā)生急性、致死性傳染病。目前,抗菌藥物的使用仍然是防控細(xì)菌性疾病的主要措施之一。由于藥物使用量的不斷加大和耐藥基因的擴(kuò)散和傳播,大腸桿菌的耐藥性正變得日益嚴(yán)重。病原菌耐藥性的傳播途徑包括基因水平轉(zhuǎn)移和基因突變等,整合子、質(zhì)粒等可移動遺傳因子在大腸桿菌耐藥基因的傳播中起到了重要的作用。本研究開展了雞、豬、奶牛源大腸桿菌對18種抗菌藥物的耐藥性的檢測,并探究大腸桿菌耐藥表型與其Ⅰ類整合子、18種質(zhì)粒存在的相關(guān)性,為大腸桿菌病的有效防治和耐藥機(jī)理等研究提供重要參考和理論基礎(chǔ)。一、大腸桿菌的耐藥性檢測采用WHO推薦的K-B紙片擴(kuò)散法,按CLSI (2012)的判定標(biāo)準(zhǔn),對分離于江蘇省的818株致病性大腸桿菌(雞源644株、豬源113株、奶牛源61株),進(jìn)行18種抗菌藥物的敏感性檢測,并分析其耐藥率和多重耐藥情況。結(jié)果表明,雞和豬源大腸桿菌的多重耐藥率分別為88.2%(568/644)和82.3%(93/113),顯著高于奶牛源大腸桿菌的21.3%(13/61)(P0.016)。雞和豬源大腸桿菌最高耐16種抗菌藥物,而奶牛源大腸桿菌最高僅耐11種。雞和豬源大腸桿菌對臨床上常用的氨芐西林、鏈霉素、四環(huán)素、萘啶酸、磺胺異惡唑和甲氧芐氨嘧啶/磺胺甲基異惡唑的耐藥率均在50%以上。然而,奶牛源大腸桿菌對抗菌藥物比較敏感,僅對氨芐西林和萘啶酸的耐藥率超過20%,而對頭孢他啶、厄他培南、阿米卡星和安曲南不表現(xiàn)耐藥。雞和豬源大腸桿菌對四環(huán)素、萘啶酸和磺胺異惡唑的耐藥最為嚴(yán)重,雞源大腸桿菌耐藥率分別為93.5%、81.2%和78.9%,’豬源大腸桿菌耐藥率分別為90.2%、84.1%和69.9%,而奶牛源大腸桿菌對四環(huán)素、萘啶酸和磺胺異惡唑的耐藥率僅為19.7%、21.3%、18.0%。二、大腸桿菌耐藥性與Ⅰ類整合子的相關(guān)性PCR檢測表明,80.9%的大腸桿菌(662/818)攜帶Ⅰ類整合子。其中,奶牛源菌株Ⅰ類整合子的陽性率為21.3%(13/61),顯著低于雞源菌株的87.0%(560/644)和豬源菌株的76.1%(86/113)(P0.014)。在雞、豬和奶牛源多重耐藥菌株中,Ⅰ類整合子的陽性率分別為93.0%,92.5%和84.6%,而非多重耐菌株Ⅰ類整合子對應(yīng)的陽性率較低,分別為39.5%,0和4.2%(P104)。大腸桿菌的耐藥表型與其Ⅰ類整合子檢測結(jié)果的相關(guān)性分析表明,大腸桿菌對5種抗菌藥物的耐藥性(氨芐西林、萘啶酸、磺胺異惡唑、恩諾沙星、甲氧芐氨嘧啶/磺胺甲基異惡唑)與Ⅰ類整合子呈現(xiàn)顯著正相關(guān)(P0.023)。三、大腸桿菌耐藥性與質(zhì)粒的相關(guān)性本研究應(yīng)用三重PCR方法,對隨機(jī)挑選的255株大腸桿菌(雞源161株、豬源67株、奶牛源27株)進(jìn)行質(zhì)粒檢測,5種質(zhì)粒為陽性,陽性率分別為4.7%(IncHI2)、15.3% (IncI1)、15.7%(IncN)、1.6%(IncA/C)、13.7%(IncY),而沒有檢測出另外13種質(zhì)粒(IncB/O、IncFIC、IncP、IncT、IncK/B、IncW、IncFIIA、IncFIA、IncFIB、IncFreP. IncX、IncHI1和IncL/M)。結(jié)果表明,在檢測出的5種陽性質(zhì)粒中,4種質(zhì)粒(IncH12,IncI1, IncN, IncA/C)的存在和大腸桿菌的耐藥性呈現(xiàn)顯著正相關(guān)(P0.049),而1種質(zhì)粒(IncY)的存在和其耐藥性呈現(xiàn)顯著負(fù)相關(guān)(P0.037)。IncHI2陽性的大腸桿菌(n=12)對氯霉素、頭孢曲松和頭孢噻肟的耐藥率較高,分別為83.3%、66.7%和66.7%；而陰性菌株(n=243)對其耐藥率僅為41.2%、12.8%和16.5%。IncI1陽性菌株(n=49)對磺胺異惡唑、甲氧芐氨嘧啶/磺胺甲基異惡唑和四環(huán)素的耐藥率高達(dá)97.9%、97.9%和95.9%；而陰性菌株(n=206)對其耐藥率僅有77.7%、78.6%和82.5%。IncN陽性菌株(n=40)對磺胺異惡唑、甲氧芐氨嘧啶/磺胺甲基異惡唑和四環(huán)素耐藥率較高,均為97.5%;而陰性菌株(n=215)對其耐藥率只有80.0%、79.5%和87.0%。IncA/C陽性菌株(n=4)對慶大霉素、頭孢曲松和頭孢他啶耐藥率較高,均為75%;而陰性菌株(n=251)對其耐藥率只有26.3%、14.3%和8.4%。有趣的是,IncY陽性菌株(n=35)對萘啶酸、恩諾沙星和環(huán)丙沙星的耐藥率為45.7%、42.8%和45、7%;而陰性菌株(n=220)對其耐藥率高達(dá)78.2%、52.3%和49.1%。綜上所述,本研究對雞、豬、奶牛源大腸桿菌進(jìn)行耐藥性檢測,并探究菌株耐藥表型與其Ⅰ類整合子、18種質(zhì)粒的相關(guān)性。雞和豬源大腸桿菌較奶牛源大腸桿菌表現(xiàn)更高的耐藥性和多重耐藥率；多重耐藥菌株Ⅰ類整合子陽性率是非多重耐藥菌株的陽性率2倍以上；大腸桿菌攜帶4種質(zhì)粒(IncHI2、IncI1, IncN、IncA/C)的一種或多種時,其耐藥性明顯增加,具有顯著正相關(guān)性。本研究檢測大腸桿菌的耐藥性,并從分子水平探索大腸桿菌耐藥性的形成因素,不僅為防治大腸桿菌病的合理用藥與科學(xué)用藥提供重要信息,也為大腸桿菌耐藥機(jī)理等研究提供理論基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：抗菌藥物 藥敏試驗 整合子 質(zhì)粒
【學(xué)位授予單位】：揚州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S852.61
【目錄】：

• 摘要2-4
• Abstract4-10
• 符號說明10-11
• 第一章 文獻(xiàn)綜述11-19
• 1.1 致病性大腸桿菌研究進(jìn)展12-15
• 1.1.1 禽致病性大腸桿菌12-13
• 1.1.2 豬致病性大腸桿菌13-14
• 1.1.3 牛致病性大腸桿菌14-15
• 1.2 細(xì)菌的耐藥現(xiàn)狀15-17
• 1.2.1 β-內(nèi)酰胺類15
• 1.2.2 喹諾酮類15-16
• 1.2.3 氨基糖苷類16
• 1.2.4 四環(huán)素類16-17
• 1.2.5 磺胺類藥物17
• 1.3 大腸桿菌Ⅰ類整合子的研究現(xiàn)狀17-18
• 1.4 大腸桿菌質(zhì)粒的研究現(xiàn)狀18-19
• 第二章 雞、豬、奶牛源大腸桿菌的耐藥性檢測19-31
• 2.1 材料19-21
• 2.1.1 菌株19-20
• 2.1.2 試劑20
• 2.1.3 藥敏紙片20
• 2.1.4 主要儀器設(shè)備20-21
• 2.2 方法21-24
• 2.2.1 培養(yǎng)基的配制21
• 2.2.2 菌株的復(fù)蘇和純化21
• 2.2.3 PCR鑒定21-23
• 2.2.4 藥敏試驗23-24
• 2.3 結(jié)果與分析24-29
• 2.3.1 菌株的復(fù)蘇、純化24-25
• 2.3.2 PCR鑒定25
• 2.3.3 藥敏試驗結(jié)果與分析25-28
• 2.3.4 多重耐藥分析28-29
• 2.4 討論29-31
• 第三章 大腸桿菌的耐藥性與其Ⅰ類整合子相關(guān)性研究31-39
• 3.1 材料31-32
• 3.1.1 菌株31
• 3.1.2 試劑和儀器31-32
• 3.2 方法32-33
• 3.2.1 核酸提取32
• 3.2.2 Ⅰ類整合子的檢測32-33
• 3.3 結(jié)果與分析33-37
• 3.3.1 Ⅰ類整合子的檢測33-35
• 3.3.2 大腸桿菌Ⅰ類整合子檢測結(jié)果及其耐藥表型的相關(guān)性35-37
• 3.4 討論37-39
• 第四章 大腸桿菌的耐藥性與其質(zhì)粒相關(guān)性研究39-53
• 4.1 材料39-40
• 4.1.1 菌株39-40
• 4.1.2 試劑和儀器40
• 4.2 方法40-42
• 4.2.1 核酸提取40
• 4.2.2 質(zhì)粒的檢測40-42
• 4.3 結(jié)果與分析42-51
• 4.3.1 質(zhì)粒的檢測42-44
• 4.3.2 大腸桿菌質(zhì)粒的檢測結(jié)果及其耐藥表型的相關(guān)性44-51
• 4.4 討論51-53
• 參考文獻(xiàn)53-59
• 全文總結(jié)59-60
• 致謝60-61
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文61-62
• 攻讀學(xué)位期間獲得發(fā)明專利62-63

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本文編號：1002542