本文關(guān)鍵詞：惡性瘧原蟲ApiAP2蛋白與var基因內(nèi)含子序列相互作用的體內(nèi)鑒定

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【摘要】：目的鑒定惡性瘧原蟲ApiAP2蛋白家族成員PF3D7_1107800與var基因內(nèi)含子保守序列(iNPE)存在體內(nèi)相互結(jié)合作用。方法提取惡性瘧原蟲標(biāo)準(zhǔn)株3D7基因組DNA,PCR擴(kuò)增PF3D7_1107800基因5′端片段。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)雙酶切后連接入原核表達(dá)載體pGex-4T-1,重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至大腸埃希菌(E.coli)BL21(DE3),異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)表達(dá)。十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)和蛋白質(zhì)印跡(Western blotting)分析重組蛋白表達(dá)情況,谷胱甘肽親和層析純化重組蛋白。20只BALB/c小鼠分為重組蛋白免疫組和PBS對照組,每組10只,免疫組小鼠每鼠背部皮下注射純化的重組蛋白100μl(約含蛋白20μg),對照組小鼠注射等量PBS,共免疫3次,每次間隔2周,末次免疫后2周處死小鼠,收集血清。重組純化蛋白G(Protein G)純化2組小鼠血清,Western blotting鑒定免疫血清抗體情況。染色質(zhì)免疫沉淀(ChIP)獲得惡性瘧原蟲DNA,qPCR檢測PF3D7_1107800蛋白抗體組在C類var基因的內(nèi)含子區(qū)域的富集情況。結(jié)果 PCR擴(kuò)增PF3D7_1107800基因5′端片段結(jié)果顯示,在約345 bp處有一特異性條帶,與理論值相符。重組表達(dá)載體pGEX-4T-1-PF3D7_1107800N經(jīng)測序表明構(gòu)建成功。重組蛋白經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)和純化后,SDS-PAGE和Western blotting結(jié)果顯示,所獲的重組蛋白為目的蛋白,其相對分子質(zhì)量(Mr)約為37 000,與預(yù)測值一致。重組蛋白免疫小鼠后,獲得抗體血清,Western blotting分析結(jié)果顯示,血清中抗體可與重組蛋白特異結(jié)合,在約Mr200 000處有一目的條帶,與預(yù)測值一致。ChIP實驗產(chǎn)物經(jīng)qPCR分析顯示,在var基因內(nèi)含子區(qū)域的相對富集程度為內(nèi)參seryl-tRNA合成酶基因區(qū)域的2倍以上。結(jié)論惡性瘧原蟲ApiAP2家族成員PF3D7_1107800可在體內(nèi)與C類var基因內(nèi)含子區(qū)域結(jié)合。
【作者單位】： 同濟(jì)大學(xué)傳染病與疫苗研究所;
【關(guān)鍵詞】： 惡性瘧原蟲 ApiAP var基因 內(nèi)含子調(diào)控蛋白
【基金】：國家自然科學(xué)基金(No.31271388) 中央高�；究蒲袠I(yè)務(wù)費專項資金~~
【分類號】：R382
【正文快照】： 目前瘧疾仍是全球主要的公共衛(wèi)生問題,每年的瘧疾死亡病例達(dá)百萬以上[1]。感染人類的瘧原蟲主要有4種,其中惡性瘧原蟲(Plasmodium falciparum)引起的惡性瘧對人類造成的危害最為嚴(yán)重。因此,惡性瘧原蟲致病相關(guān)毒力因子的研究一直是國際上瘧疾研究的熱點[2-4]。惡性瘧原蟲紅細(xì)

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 張青鋒;潘衛(wèi)慶;;惡性瘧原蟲Var基因家族的變異調(diào)控機制[J];中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;2007年04期

2 方小楠;;惡性瘧原蟲var基因家族與抗原變異研究進(jìn)展[J];中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;2010年02期

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 楊永焱;王秋生;;瘧疾預(yù)防的現(xiàn)狀及進(jìn)展[J];海南醫(yī)學(xué);2014年04期

2 李節(jié);何永蜀;楊照青;;惡性瘧原蟲var基因相關(guān)研究新進(jìn)展[J];熱帶醫(yī)學(xué)雜志;2009年02期

3 李星潘;梁韶暉;;蚊唾液腺功能蛋白研究進(jìn)展[J];熱帶醫(yī)學(xué)雜志;2013年11期

4 張霞;巨紅妹;王云華;李雅杰;;藍(lán)氏賈第鞭毛蟲沉默信息調(diào)節(jié)因子2(Sir2)基因的克隆、表達(dá)與純化[J];中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;2011年03期

5 張霞;巨紅妹;李雅杰;;沉默信息調(diào)節(jié)因子2與基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控[J];中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;2011年06期

6 Segun Isaac Oyedeji;Henrietta Oluwatoyin Awobode;Chiaka Anumudu;J，

本文編號：985264