本文關鍵詞：小鼠IL-35基因shRNA慢病毒載體構建與RNAi效率的鑒定

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【摘要】：目的構建小鼠IL-35基因靶向shRNA干擾的慢病毒表達載體,抑制小鼠肝癌細胞Hepa1~6中IL-35的表達。方法 設計合成IL-35EBI3亞基基因靶向shRNA序列,構建shRNA載體PLKO.1-IL-35 EBI3shRNA-GFP,測序正確后,三質粒病毒包裝系統(tǒng)(質粒載體+psPAX2+pMD2.G)包裝成表達干擾IL-35 EBI3 shRNA的慢病毒,慢病毒感染靶細胞Hepa1~6,熒光顯微鏡下觀察感染效率,以實時定量RT-PCR分析對Hepa1~6細胞IL-35 EBI3基因表達的干擾效果。結果 測序證實,成功構建了真核表達干擾載體PLKO.1-IL-35 EBI3shRNA-GFP;并成功包裝出表達干擾IL-35 EBI3 shRNA的慢病毒,以MOI值4.6pfu/細胞感染Hepa1~6細胞,鏡下顯示感染效率約90%;RT-PCR結果表明所構建的3個慢病毒載體PLKO.1-IL-35 EBI3 shRNA-GFP均可以有效干擾IL-35 EBI3的表達,其中E545干擾效率最高,為64%.結論 成功構建IL-35EBI3亞基基因的shRNA慢病毒表達載體,該慢病毒表達載體能夠在細胞水平有效沉默靶基因。
【作者單位】： 濰坊醫(yī)學院免疫學教研室;
【關鍵詞】： IL- EBI shRNA 慢病毒
【基金】：山東省自然科學基金項目(課題編號:ZR2009CM019) 山東省教育廳資助課題(課題編號:J10LF62)
【分類號】：R346
【正文快照】： IL-35是2007年發(fā)現(xiàn)的由調節(jié)性T細胞(regulato-ry T cells,Treg)特異性產生的抑制性細胞因子⑴。人類和小鼠IL-35都是由EB病毒誘導基因3(epstein barr virus induced gene3,EBI3)和IL-12p35亞基組成的異源二聚體。另外EBI3和IL-27p28可組成異源二聚體IL-27;IL-12p35和IL-12p40

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本文編號：979296