本文關(guān)鍵詞：銅綠假單胞菌外膜蛋白F及B型鞭毛蛋白與VP22融合DNA疫苗免疫效力和感染保護(hù)作用的研究

  更多相關(guān)文章： 銅綠假單胞菌 VP22 DNA疫苗 外膜蛋白F 鞭毛蛋白B 免疫應(yīng)答 肺部感染模型

【摘要】：目的:評(píng)價(jià)I型單純皰疹病毒(herpes simplex virus 1,HSV-1)間層蛋白VP22能否增強(qiáng)銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)外膜蛋白F(the outer membrane protein F,OprF)及B型鞭毛蛋白(type B flagellins,FlaB)的體液、細(xì)胞免疫效力和感染保護(hù)作用。方法:1.動(dòng)物免疫:(1)提取DNA疫苗pVAX1-VP22、pVAX1-OprF、pVAX1-OprF-VP22、pVAX1-FlaB、pVAX1-FlaB-VP22;(2)用體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑介導(dǎo)將疫苗肌肉注射BALB/c小鼠,免疫三次后制備小鼠抗血清,分離脾臟T淋巴細(xì)胞。2.體液免疫:間接ELISA檢測IgG1與IgG2a抗血清效價(jià)的比值。3.細(xì)胞免疫:(1)CCK-8檢測T淋巴細(xì)胞的增殖活性;(2)ELISPOT檢測細(xì)胞因子IFN-γ和IL-4分泌水平。4.感染保護(hù)實(shí)驗(yàn):(1)腹腔注射PA于FlaB/VP22疫苗免疫后的BALB/c小鼠,構(gòu)建銅綠假單胞菌肺部感染模型,一周后分離肺組織;(2)肺組織勻漿活菌計(jì)數(shù)評(píng)價(jià)肺部PA感染程度;(3)HE染色觀察肺組織病變情況。結(jié)果:1.體液免疫:間接ELISA結(jié)果顯示,pVAX1-OprF-VP22、pVAX1-OprF、pVAX1-FlaB-VP22和pVAX1-FlaB組小鼠血清均產(chǎn)生了特異性IgG1、IgG2a抗體,而pVAX1-VP22組和PBS組則為陰性。pVAX1-OprF-VP22組抗血清效價(jià)IgG2a/IgG1的比值顯著高于pVAX1-Opr F組(P0.05),pVAX1-FlaB-VP22組抗血清效價(jià)IgG2a/IgG1的比值顯著高于pVAX1-FlaB組(P0.05),Th細(xì)胞免疫應(yīng)答分型傾向于Th1型。2.細(xì)胞免疫:(1)CCK-8檢測T淋巴細(xì)胞的增殖活性,pvax1-oprf-vp22組刺激指數(shù)(si)顯著高于pvax1-oprf組(p0.05),pvax1-oprf組顯著高于pvax1-vp22組和陰性對照(pbs)組,pvax1-vp22組與陰性對照(pbs)組之間無顯著差異(p0.05);pvax1-flab-vp22組刺激指數(shù)(si)顯著高于pvax1-flab組(p0.05),pvax1-flab組顯著高于pvax1-vp22組與陰性對照(pbs)組,pvax1-vp22組與陰性對照(pbs)組之間無顯著差異(p0.05)。(2)elispot檢測可分泌ifn-γ和il-4的t淋巴細(xì)胞數(shù)目,pvax1-oprf-vp22組分泌ifn-γ的t細(xì)胞顯著高于pvax1-oprf組,pvax1-oprf組顯著高于pvax1-vp22組和陰性對照(pbs)組,pvax1-vp22組與陰性對照(pbs)組之間無顯著差異(p0.05);pvax1-flab-vp22組分泌ifn-γ的t細(xì)胞數(shù)顯著高于pvax1-flab組(p0.05),pvax1-flab組顯著高于pvax1-vp22組與陰性對照(pbs)組,pvax1-vp22組與陰性對照(pbs)組之間無顯著差異(p0.05)。所有免疫組分泌il-4的t細(xì)胞數(shù)都很低。3.感染保護(hù)實(shí)驗(yàn):(1)肺組織勻漿活菌計(jì)數(shù)結(jié)果顯示,pvax1-flab-vp22組顯著低于pvax1-flab組(p0.05),pvax1-flab組顯著低于pvax1-vp22組與陰性對照(pbs)組,pvax1-vp22組與陰性對照(pbs)組之間無顯著差異(p0.05)。(2)肺組織病理he染色切片顯微鏡下可觀察到,pvax1-vp22組和pbs對照組肺組織感染嚴(yán)重,肺泡結(jié)構(gòu)消失,間質(zhì)增生,支氣管腔內(nèi)大量組織壞死。pvax1-flab組肺泡結(jié)構(gòu)較完整,支氣管腔和間質(zhì)內(nèi)有中性粒細(xì)胞、漿細(xì)胞等大量炎癥細(xì)胞浸潤。pvax1-flab-vp22組可見部分紅細(xì)胞產(chǎn)生,有充血現(xiàn)象。結(jié)論:1.vp22可顯著增強(qiáng)單表達(dá)抗原oprf與flab的在小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)特異性體液和細(xì)胞免疫反應(yīng)的效力,且更傾向于細(xì)胞免疫(th1型)。2.腹腔注射可成功建立銅綠假單胞菌肺部感染模型,VP22與FlaB融合表達(dá)的DNA疫苗可在一定程度上預(yù)防PA感染。
【關(guān)鍵詞】：銅綠假單胞菌 VP22 DNA疫苗 外膜蛋白F 鞭毛蛋白B 免疫應(yīng)答 肺部感染模型
【學(xué)位授予單位】：川北醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R392
【目錄】：

• 致謝4-5
• 摘要5-8
• Abstract8-13
• 前言13-17
• 第一部分 銅綠假單胞菌外膜蛋白F及B型鞭毛蛋白與VP22融合DNA疫苗免疫效力的研究17-33
• 實(shí)驗(yàn)材料17-18
• 實(shí)驗(yàn)方法18-25
• 結(jié)果25-33
• 第二部分 銅綠假單胞菌B型鞭毛蛋白與VP22融合DNA疫苗免疫抑制小鼠肺部銅綠假單胞菌感染的研究33-40
• 實(shí)驗(yàn)材料33-34
• 實(shí)驗(yàn)方法34-37
• 結(jié)果37-40
• 討論40-46
• 結(jié)論46-47
• 參考文獻(xiàn)47-52
• 綜述：銅綠假單胞菌耐藥機(jī)制研究進(jìn)展52-61
• 參考文獻(xiàn)58-61
• 附錄61-66
• 個(gè)人簡歷66

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