本文關(guān)鍵詞：PHO4、HAP2基因參與白念珠菌唑類藥物耐受的調(diào)控機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 白念珠菌 藥物敏感性 氧化應(yīng)激 線粒體呼吸 鐵代謝

【摘要】：研究目的:利用白念珠菌轉(zhuǎn)錄因子缺失菌庫,篩選不同缺失菌對抗真菌藥物敏感性差異,發(fā)現(xiàn)對藥物敏感性產(chǎn)生顯著影響的轉(zhuǎn)錄因子,進(jìn)而考察該轉(zhuǎn)錄因子對白念珠菌藥物敏感性的影響作用及調(diào)控機(jī)制。研究方法:通過微量液基稀釋法、點板實驗(Spot Assay)進(jìn)行白念珠菌轉(zhuǎn)錄因子缺失菌的藥物敏感性的篩選。采用實時定量PCR(Realtime-PCR)的方法檢測白念珠菌轉(zhuǎn)錄因子缺失菌中與耐藥性相關(guān)的外排泵等相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄水平,并通過羅丹明6G外排實驗,進(jìn)一步考察白念珠菌外排泵活性。通過測定胞內(nèi)ATP水平和線粒體膜電位,考察藥物外排泵活性改變是否與線粒體呼吸功能及能量代謝異常有關(guān)。利用鐵離子螯合劑紅菲繞啉(BPS)考察缺失菌株鐵代謝情況。通過生長曲線法考察菌株對活性氧類物質(zhì)H2O2的敏感性,并測定胞內(nèi)活性氧水平。Realtime-PCR實驗考察抗氧化相關(guān)基因的表達(dá)并檢測菌株胞內(nèi)還原酶活性。實驗結(jié)果:通過藥物敏感性篩選發(fā)現(xiàn),與親本菌SN250相比,pho4△/△和hap2△/△對唑類藥物的敏感性顯著增加。pho4△/△對唑類抗真菌藥敏感,對羅丹明外排能力減弱,但耐藥相關(guān)基因CDR1,MDR1以及ERG11的表達(dá)卻有所增加。進(jìn)一步考察發(fā)現(xiàn),pho4△/△對H2O2的敏感性顯著增加,菌株抵抗氧化應(yīng)激的能力下降,胞內(nèi)活性氧水平下降�？疾焱蛔冎甑木�粒體功能,發(fā)現(xiàn)ATP含量下降,線粒體膜電位略升高。HAP2基因缺失導(dǎo)致白念珠菌對抗真菌藥物的敏感性增高,藥物外排泵編碼基因CDR1,MDR1以及耐藥相關(guān)基因ERG11轉(zhuǎn)錄水平下降,突變株對羅丹明6G外排能力降低,即藥物外排泵活性下降。HAP2基因缺失導(dǎo)致菌株在缺鐵環(huán)境中生長減慢,胞內(nèi)鐵離子含量降低。缺失了HAP2基因的菌株,線粒體呼吸鏈復(fù)合物Ⅱ主要成分琥珀酸脫氫酶編碼基因SDH2表達(dá)下降,胞內(nèi)ATP水平和線粒體膜電位均降低,菌株能量代謝異常,胞內(nèi)ROS濃度與野生型沒有差異,但與鐵離子匱乏相一致的是,在咪康唑誘導(dǎo)下,其ROS產(chǎn)生的能力顯著低于野生型,同時,抗氧化基因SOD4,GLR1,TRR1以及胞內(nèi)GSH含量顯著增高。結(jié)論:轉(zhuǎn)錄因子Pho4的缺失可能通過降低白念珠菌的抗氧化應(yīng)激能力,減弱對藥物的外排作用而導(dǎo)致對唑類藥物敏感,但其具體的調(diào)控機(jī)制有待進(jìn)一步研究。HAP2基因是鐵代謝相關(guān)的重要轉(zhuǎn)錄因子,該基因缺失導(dǎo)致白念珠菌鐵離子攝取降低,鐵代謝異常。由于鐵離子是眾多酶促反應(yīng)的輔助離子,在缺失HAP2基因的白念珠菌中,菌株能量代謝異常,ATP產(chǎn)生減少,進(jìn)而減少了ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白、易化擴(kuò)散超家族蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)所需的能量,最終導(dǎo)致突變株對唑類藥物的敏感性增加。與此同時,咪康唑誘導(dǎo)下的胞內(nèi)活性氧形成能力降低與鐵離子匱乏呈正相關(guān),HAP2缺失菌中胞內(nèi)活性氧沒有差異,但在咪康唑誘導(dǎo)下,其活性氧形成能力降低,菌株胞內(nèi)抗氧化還原基因轉(zhuǎn)錄水平升高,還原酶活性增高。
【關(guān)鍵詞】：白念珠菌 藥物敏感性 氧化應(yīng)激 線粒體呼吸 鐵代謝
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R379.4
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 縮略詞表10-12
• 前言12-17
• 第一部分：對白念珠菌轉(zhuǎn)錄因子缺失菌庫進(jìn)行藥物敏感性篩選和生物信息學(xué)分析17-29
• 一、材料與方法17-24
• 二、實驗結(jié)果24-27
• 三、討論27-29
• 第二部分：轉(zhuǎn)錄因子Pho4p影響白念珠菌藥物敏感性的機(jī)制研究29-45
• 一、材料與方法29-36
• 二、實驗結(jié)果36-43
• 三、討論43-45
• 第三部分：轉(zhuǎn)錄因子Hap2p參與白念珠菌藥物敏感性的調(diào)控機(jī)制45-62
• 一、材料與方法45-51
• 二、實驗結(jié)果51-60
• 三、討論60-62
• 總結(jié)62-63
• 參考文獻(xiàn)63-66
• 文獻(xiàn)綜述66-96
• References85-96
• 在讀期間參加科研工作情況96-97
• 致謝97

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉為國;黃敏;;白念珠菌粘附上皮細(xì)胞的機(jī)制[J];國外醫(yī)學(xué)(微生物學(xué)分冊);2002年02期

2 龐傳超,黃冰玉,崔紹山,李守柔;兼并復(fù)合聚合酶鏈反應(yīng)檢測白念珠菌和其它念珠菌[J];深圳中西醫(yī)結(jié)合雜志;2002年05期

3 馮文莉;王艷青;奚志琴;楊靜;張潤梅;冀英;吳媛;賈曉強(qiáng);;非白念珠菌和白念珠菌感染危險因素的對比研究[J];現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué);2011年17期

4 譚宏月;陳麗華;皇幼明;鐘彬;顧軍;溫海;;白念珠菌基因敲除技術(shù)的研究進(jìn)展[J];中國真菌學(xué)雜志;2012年06期

5 侯幼紅,王正文,王立新;白念珠菌致病方式的研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué).皮膚病學(xué)分冊;1990年05期

6 張育華;;白念珠菌與臨床[J];瀘州醫(yī)學(xué)院學(xué)報;1993年01期

7 趙敬軍;;白念珠菌分泌型天冬氨酸蛋白酶的研究近況[J];國外醫(yī)學(xué)(微生物學(xué)分冊);2000年02期

8 牛云彤,李少平;白念珠菌毒力因子研究進(jìn)展[J];中國微生態(tài)學(xué)雜志;2000年01期

9 王魯,刁慶春,蔣戈,劉榮卿,鐘白玉;白念珠菌保護(hù)性單抗的研究[J];中華皮膚科雜志;2001年05期

10 王英;白念珠菌粘附機(jī)制研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué).皮膚性病學(xué)分冊;2001年02期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王冬云;譚升順;馬慧群;馬韻琴;陳慶秀;;白念珠菌的毒力研究——分泌性酸性蛋白酶活力的測定[A];2001年中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2001年

2 滿旭;王惠平;;白念珠菌轉(zhuǎn)錄因子編碼基因表達(dá)與氟康唑耐藥的關(guān)系[A];中華醫(yī)學(xué)會第十八次全國皮膚性病學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2012年

3 黃廣華;;白念珠菌有性生殖、形態(tài)發(fā)生及毒性的進(jìn)化[A];中國菌物學(xué)會第五屆會員代表大會暨2011年學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2011年

4 王慧;徐寧;喻其林;程欣欣;邢來君;李明春;;鈣細(xì)胞存活途徑與白念珠菌的致病性[A];中國菌物學(xué)會第五屆會員代表大會暨2011年學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2011年

5 閻瀾;李妙海;曹永兵;高平揮;王彥;姜遠(yuǎn)英;;白念珠菌耐藥新蛋白——交替氧化酶[A];藥學(xué)發(fā)展前沿論壇及藥理學(xué)博士論壇論文集[C];2008年

6 郭仁勇;;白念珠菌聚苯乙烯黏附增強(qiáng)基因1的研究進(jìn)展[A];2008年浙江省檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2008年

7 ;線粒體功能在不同環(huán)境對白念珠菌生存及代謝的影響[A];2012年中國菌物學(xué)會學(xué)術(shù)年會會議摘要[C];2012年

8 曾躍斌;;白念珠菌全基因組表達(dá)譜芯片在抗真菌藥物研究中的應(yīng)用[A];中國藥理學(xué)會第十一屆全國化療藥理學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2012年

9 周萬青;沈瀚;張之烽;張葵;;白念珠菌臨床分離調(diào)查及基因分型研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國中青年檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2012年

10 景偉芳;王惠平;;白念珠菌對唑類藥物耐藥機(jī)制的研究進(jìn)展[A];中華醫(yī)學(xué)會第十五次全國皮膚性病學(xué)術(shù)會議論文集[C];2009年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 國虹 雨凈;微生物的是是非非[N];中國教育報;2001年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 潘搏;白念珠菌甘露多糖疫苗評價及白念珠菌侵入人內(nèi)皮和上皮細(xì)胞動態(tài)觀察[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

2 賈淑琳;香蓮方對耐藥白念珠菌外排泵基因表達(dá)影響的研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2016年

3 高盈;口腔和陰道黏膜上皮細(xì)胞與白念珠菌相互作用的免疫學(xué)機(jī)制比較研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2016年

4 徐大勇;白念珠菌質(zhì)膜蛋白CaRch1對細(xì)胞質(zhì)內(nèi)鈣離子穩(wěn)態(tài)和耐藥調(diào)控功能的機(jī)理研究[D];江南大學(xué);2016年

5 胡志德;miR-146a在白念珠菌引發(fā)的固有免疫應(yīng)答中的調(diào)節(jié)作用[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2016年

6 劉澤虎;白念珠菌形態(tài)、胞壁多糖的結(jié)構(gòu)及其免疫學(xué)活性的相關(guān)研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2009年

7 唐寧楓;白念珠菌烯醇化酶的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2000年

8 王平;陰道念珠菌菌種及香蓮方逆轉(zhuǎn)白念珠菌耐藥基因組學(xué)研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2013年

9 許懿;小檗堿與氟康唑協(xié)同抗耐藥白念珠菌的作用機(jī)制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2010年

10 李彩霞;陰道細(xì)菌群落多樣性及外陰陰道念珠菌病相關(guān)白念珠菌基因多態(tài)性研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 毛艷紅;HSP90抑制劑對白念珠菌刺激巨噬細(xì)胞分泌IL-23的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

2 段志敏;白念珠菌誘導(dǎo)人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞（THP-1細(xì)胞）固有免疫應(yīng)答機(jī)制的初步研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

3 徐輝;5-氨基酮戊酸光動力療法對白念珠菌抗菌效應(yīng)研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2015年

4 嚴(yán)園園;黃連解毒湯乙酸乙酯提取物對白念珠菌毒力因子的作用研究[D];安徽中醫(yī)藥大學(xué);2015年

5 潘彥衛(wèi);白念珠菌Sap與伊曲康唑耐藥性關(guān)系的研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

6 呂亞萍;白念珠菌ERG4基因突變/高表達(dá)與唑類藥物耐藥的關(guān)系[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

7 李晴;VVC患者臨床分離白念珠菌鋅簇轉(zhuǎn)錄因子Cap1、Mrr1對外排泵基因MDR1的作用[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

8 牛理達(dá);線粒體呼吸鏈相關(guān)基因在不同碳源條件下對白念珠菌菌絲形成的影響[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

9 曹雪姣;法尼醇對白念珠菌cAMP-PKA信號通路作用的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2015年

10 楊宇;基于代謝組學(xué)的白念珠菌對唑類藥物交叉耐藥機(jī)制的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

，

本文編號：927891