本文關(guān)鍵詞：基于滾環(huán)擴(kuò)增的鴨乙型肝炎病毒共價(jià)閉合環(huán)狀DNA檢測(cè)方法的建立

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【摘要】：滾環(huán)擴(kuò)增(RCA)是新近發(fā)展起來(lái)的一種能特異性擴(kuò)增環(huán)形DNA的實(shí)驗(yàn)技術(shù),自2008年以來(lái)被廣泛用于HBV基因全長(zhǎng)擴(kuò)增及共價(jià)閉合環(huán)狀DNA(cccDNA)耐藥突變分析等研究。為了便于鴨乙型肝炎病毒(DHBV)cccDNA的分析,本研究建立了基于RCA的DHBV cccDNA的檢測(cè)方法。通過(guò)針對(duì)DHBV高度保守序列設(shè)計(jì)的4對(duì)RCA硫化修飾引物,以血清DHBV DNA為陰性對(duì)照,從肝組織DHBV DNA標(biāo)本中擴(kuò)增得到DHBV cccDNA。然后用跨缺口引物擴(kuò)增RCA產(chǎn)物測(cè)序替代限制性內(nèi)切酶切分析進(jìn)行DHBV cccDNA鑒定。應(yīng)用該方法檢測(cè)39份攜帶DHBV麻鴨肝組織與血清標(biāo)本結(jié)果顯示:全部肝組織標(biāo)本均檢出DHBV cccDNA,而全部血清標(biāo)本則均無(wú)DHBV cccDNA檢出,表明本研究建立的基于RCA的DHBV cccDNA檢測(cè)法具有良好的特異性和靈敏性。該方法的建立為應(yīng)用鴨乙型肝炎病毒動(dòng)物模型研究cccDNA在病毒致病機(jī)制中的作用以及評(píng)價(jià)抗病毒療效奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【作者單位】： 桂林醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： 滾環(huán)擴(kuò)增 鴨乙型肝炎病毒 共價(jià)閉合環(huán)狀DNA
【基金】：廣西自然科學(xué)基金項(xiàng)目2012GXNSFAA053146資助
【分類號(hào)】：R373.21
【正文快照】： 乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)共價(jià)閉合環(huán)狀DNA(Covalently closed circular DNA,cccDNA)是病毒復(fù)制、持續(xù)感染以及抗病毒藥物停用后病情反復(fù)的關(guān)鍵因素[1-2]。檢測(cè)病毒的cccD-NA可了解病毒感染狀態(tài)及傳染性,評(píng)價(jià)藥物療效并幫助監(jiān)測(cè)機(jī)體病毒的清除程度。然而,既往檢測(cè)H

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：895246