本文關鍵詞：金黃色葡萄球菌α-溶血素及其突變體的原核表達和免疫學活性

  更多相關文章： 金黃色葡萄球菌 α-溶血素 原核細胞 基因表達 溶血活性 免疫保護

【摘要】：目的原核表達金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)α-溶血素(α-hemolysin,Hla)及其突變體,并檢測其免疫學活性。方法采用PCR法從S.aureus中擴增hla基因,將該基因克隆至原核表達載體p ET28a中,構建重組表達質(zhì)粒p ET28a-hla,并利用點突變試劑盒進行突變,獲得重組質(zhì)粒p ET28a-hlaH35L。將兩種重組表達質(zhì)粒轉化大腸埃希菌BL21(DE3),IPTG誘導表達;表達的重組蛋白經(jīng)Ni-NTA親和層析和CM離子交換層析純化后,檢測其溶血活性、免疫血清的抑制溶血活性及HlaH35L蛋白的免疫保護作用。結果重組表達質(zhì)粒p ET28a-hla經(jīng)雙酶切和測序證明構建正確;重組質(zhì)粒p ET28a-hlaH35L的測序結果顯示,第35位氨基酸突變位點與設計相符。表達的Hla和HlaH35L蛋白相對分子質(zhì)量約為36 000,均為可溶性表達,表達量約占菌體總蛋白的50%,純化后純度均在90%以上。Hla具有溶血活性,溶血比活為152 HU/mg;HlaH35L無溶血活性;抗Hla和抗HlaH35L血清均具有抑制Hla溶血的活性;在小鼠滴鼻攻擊模型中,HlaH35L具有一定的保護作用。結論成功在大腸埃希菌中表達了具有良好免疫學活性的Hla及其突變體HlaH35L,為篩選S.aureus候選疫苗組分奠定了實驗基礎。
【作者單位】： 上海生物制品研究所有限責任公司;
【關鍵詞】： 金黃色葡萄球菌 α-溶血素 原核細胞 基因表達 溶血活性 免疫保護
【分類號】：Q786;R392-33
【正文快照】： 金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)是一種革蘭陽性條件致病菌,廣泛分布于自然界。S.aureus是人類化膿感染中最常見的病原菌,可引起局部化膿感染,也可引起肺炎、偽膜性腸炎、心包炎,甚至敗血癥、膿毒癥等全身感染。S.aureus的毒力因子主要包括莢膜多糖、黏附素、

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