本文關(guān)鍵詞：高內(nèi)涵篩選與流式細(xì)胞分析技術(shù)在心肌成纖維細(xì)胞增殖研究中的應(yīng)用

  更多相關(guān)文章： 高內(nèi)涵 流式細(xì)胞術(shù) 成纖維細(xì)胞 細(xì)胞增殖 細(xì)胞周期

【摘要】：心肌成纖維細(xì)胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖參與了心臟疾病的病理生理過(guò)程并發(fā)揮重要作用。本文旨在應(yīng)用高內(nèi)涵篩選(high-content screening,HCS)和流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry,FCM)分析評(píng)價(jià)CFs增殖,以期建立精確定量評(píng)價(jià)細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期的方法。采用酶消化法分離C57BL/6J新生乳小鼠(出生24～48 h)CFs,盤(pán)狀結(jié)構(gòu)域受體(discoidin domain receptor 2,DDR2)染色顯示分離后培養(yǎng)的CFs純度95%。CFs經(jīng)血清饑餓12 h后給予10%胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)處理24 h,進(jìn)行溴脫氧尿苷(5-bromodeoxyuridine,BrdU)和二脒基苯基吲哚(diamidino-phenylindole,DAPI)原位染色或BrdU和7-氨基放線菌素D(7-Aminoactinomycin D,7-AAD)單細(xì)胞懸液染色,分別利用HCS或FCM檢測(cè)CFs增殖和細(xì)胞周期。結(jié)果表明:(1)HCS分析顯示,10%FBS誘導(dǎo)組BrdU陽(yáng)性細(xì)胞比例與無(wú)血清對(duì)照組比較有顯著性差異[(12.96±0.67)%vs(2.77±0.33)%;P0.05];細(xì)胞周期分析顯示,細(xì)胞處于G0/G1期DNA為二倍體(2N),進(jìn)入S期DNA復(fù)制,G2期DNA倍增(4N),到M期DNA平分到兩個(gè)子細(xì)胞核中(2N)。(2)FCM分析顯示,10%FBS誘導(dǎo)組BrdU陽(yáng)性細(xì)胞比例比無(wú)血清對(duì)照組明顯增大,差異顯著[(11.10±0.42)%vs(2.22±0.31)%;P0.05];DNA含量直方圖細(xì)胞周期分析顯示,10%FBS誘導(dǎo)組S期平臺(tái)比對(duì)照組明顯抬高。(3)對(duì)比分析HCS和FCM檢測(cè)結(jié)果,BrdU陽(yáng)性比例以及G0/G1、S、G2/M期細(xì)胞百分比等各項(xiàng)指標(biāo)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。證實(shí)HCS和FCM兩種技術(shù)能夠應(yīng)用于定量分析CFs增殖和細(xì)胞周期,方法實(shí)用可靠,結(jié)果一致。
【作者單位】： 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京安貞醫(yī)院;北京市心肺血管疾病研究所 心血管重塑相關(guān)疾病教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 高內(nèi)涵 流式細(xì)胞術(shù) 成纖維細(xì)胞 細(xì)胞增殖 細(xì)胞周期
【基金】：supported by the National Natural Science Foundation of China(No.81230006,81000069) Beijing Natural Science Foundation,China(No.2010B031,7132043)
【分類(lèi)號(hào)】：R329.2
【正文快照】： 心肌成纖維細(xì)胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖參與了心室肥厚、缺血性心臟病和心衰等多種心血管疾病的病理過(guò)程[1],是發(fā)生心臟疾病的重要病理基礎(chǔ)之一,準(zhǔn)確評(píng)價(jià)CFs增殖有助于發(fā)現(xiàn)新的致病機(jī)制和治療靶點(diǎn)。溴脫氧尿苷(5-bromodeoxyuridine,BrdU)檢測(cè)法可通過(guò)測(cè)定DNA合成直接評(píng)

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 郝嘉;游凱;肖穎彬;;心肌成纖維細(xì)胞的特性和調(diào)節(jié)[J];心血管病學(xué)進(jìn)展;2011年03期

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 戴斌;崔猛;張宏;;高糖狀態(tài)下心肌成纖維細(xì)胞Ⅰ、Ⅲ型膠原表達(dá)變化的觀察[J];重慶醫(yī)學(xué);2013年15期

2 楊瑞寧;周顯光;張迪;江淑芳;;流式細(xì)胞術(shù)在轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究中的應(yīng)用[J];國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2013年16期

3 張捷;戴紅艷;丁華民;蔡尚郎;于普艷;;高糖對(duì)大鼠心肌成纖維細(xì)胞UⅡ及其受體表達(dá)影響[J];青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2015年04期

4 范凱;王超;宋浩鑫;蔣雅楠;劉艷;;氯化膽堿對(duì)異丙腎上腺素誘導(dǎo)大鼠心肌成纖維細(xì)胞增殖及膠原合成的影響[J];哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2013年01期

5 辛毅;劉颯;許秀芳;李溫斌;黃益民;羅毅;周玉杰;;成年小鼠心成纖維細(xì)胞的原代培養(yǎng)及生物學(xué)特性[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2012年11期

6 崔巍;李玉琳;王吉靜;張聰聰;吳依娜;;細(xì)胞組學(xué)技術(shù)在心肌細(xì)胞凋亡研究中的應(yīng)用[J];心肺血管病雜志;2013年06期

7 羅卓卡;李雪華;劉磊;陳可塑;王中越;陳龍;;安全性評(píng)價(jià)對(duì)照藥E-4031、特非那丁、西沙必利和維拉帕米的心臟電生理特征[J];中國(guó)新藥雜志;2014年02期

8 張文美;賈立昕;李濤濤;肖傳實(shí);邊云飛;杜杰;;巨噬細(xì)胞分化在心肌梗死后心臟重構(gòu)中的作用研究[J];中國(guó)藥物與臨床;2014年01期

9 趙偉;李玉琳;賈立昕;石洪濤;張文美;杜杰;;自噬相關(guān)基因5下調(diào)抑制血管緊張素Ⅱ介導(dǎo)的巨噬細(xì)胞凋亡[J];中國(guó)分子心臟病學(xué)雜志;2014年01期

10 Jia Zhao;Rushil Randive;James A Stewart;;Molecular mechanisms of AGE/RAGE-mediated fibrosis in the diabetic heart[J];World Journal of Diabetes;2014年06期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 付剛;改善心力衰竭預(yù)后的相關(guān)研究[D];吉林大學(xué);2014年

2 呂娜;雪衣藻響應(yīng)和適應(yīng)環(huán)境脅迫分子調(diào)節(jié)的多組學(xué)研究[D];華南理工大學(xué);2014年

3 謝永進(jìn);AngⅡ、醛固酮致心肌纖維化及Wnt1在其中的作用[D];中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2014年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 羅卓卡;異丙嗪加重雙黃連中藥注射劑致心律失常作用的研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2013年

2 王和;腺苷A1和A2A受體介導(dǎo)的cAMP-PKA-CREB信號(hào)通路在大鼠酒精性肝纖維化HSC模型中的作用[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2014年

3 張文美;巨噬細(xì)胞分化在心肌梗死后心臟重構(gòu)中作用的研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2014年

4 李露;膠球藻C-169的高通量培養(yǎng)與油脂積累能力的快速評(píng)價(jià)[D];華南理工大學(xué);2014年

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 崔巍;李玉琳;吳依娜;張聰聰;劉颯;趙莉敏;;高內(nèi)涵篩選與流式細(xì)胞分析技術(shù)在心肌成纖維細(xì)胞增殖研究中的應(yīng)用[J];生理學(xué)報(bào);2014年02期

2 ;[J];;年期

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 駐滬記者　 張莉;高內(nèi)涵藥物篩選技術(shù)力推我國(guó)藥物創(chuàng)新[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2006年

2 王春;我國(guó)首個(gè)高內(nèi)涵藥物篩選技術(shù)平臺(tái)搭建[N];科技日?qǐng)?bào);2004年

3 張建中;我國(guó)首個(gè)高內(nèi)涵藥物篩選技術(shù)平臺(tái)啟用[N];健康報(bào);2004年

4 上 分;我國(guó)首個(gè)高內(nèi)涵藥物篩選中外合作技術(shù)平臺(tái)正式啟用[N];大眾科技報(bào);2004年

5 葉國(guó)標(biāo) 劉牧洋;高內(nèi)涵藥物篩選技術(shù)在中國(guó)國(guó)家新藥篩選中心啟用[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2004年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 解俊領(lǐng);調(diào)控paraspeckles新型小分子探針高內(nèi)涵篩選模型的建立與優(yōu)化[D];華東師范大學(xué);2012年

2 黃小杰;調(diào)控paraspeckles和神經(jīng)干細(xì)胞小分子化合物高內(nèi)涵篩選模型的建立與優(yōu)化[D];華東師范大學(xué);2013年

3 周晨光;基于微電極/基于數(shù)字顯微圖像的腫瘤治療藥物篩選新方法研究[D];浙江大學(xué);2007年

，

本文編號(hào)：892717