本文關鍵詞：分泌型畢赤酵母人全長抗體庫的構建與鑒定

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【摘要】：目的基于N-糖基化部分改造畢赤酵母構建表達分泌型人全長抗體庫。方法基于酵母分泌型表達載體pPICZαA構建雙啟動子串聯(lián)表達重鏈和輕鏈恒定區(qū)基因的載體pPICZαA-C H-C L,經(jīng)基因序列分析和Western blot分析驗證。設計44對簡并引物經(jīng)逆轉錄多聚酶鏈式反應(RT-PCR)從人外周血單個核細胞(PBMC)中擴增獲得輕鏈可變區(qū)V L和重鏈可變區(qū)V H基因庫。通過PCR將其插入上述恒定區(qū)表達載體構建全長抗體表達庫pPICZαA-V H-C H-V L-C L。將該庫電轉化N-糖基化部分改造后宿主菌株GS115Y。隨機挑取20個平板克隆進行菌液PCR鑒定、基因分析,并提交IgBLAST-imgt數(shù)據(jù)庫鑒定抗體庫正確性與多樣性。結果獲得表達重鏈和輕鏈恒定區(qū)的表達載體pPICZαA-C H-C L,并在此基礎上初步獲得全長抗體表達庫pPICZαA-V H-C H-V L-C L,庫容量為105。結論成功構建了分泌型N-糖基化畢赤酵母人全長抗體庫。
【作者單位】： 軍事醫(yī)學科學院放射與輻射醫(yī)學研究所藥理毒理研究室;軍事醫(yī)學科學院微生物流行病研究所病原微生物生物安全國家重點實驗室;
【關鍵詞】： 畢赤酵母 人全長抗體 N-糖基化改造 抗體庫 分泌表達
【基金】：北京市基金(5113034)
【分類號】：R392.11
【正文快照】： 人源化抗體和完全人源抗體是治療性單克隆抗體(mAb)的研發(fā)趨勢,近年來,基于人源非免疫抗體庫篩選抗體技術因其簡單、便捷,可以同時實現(xiàn)針對多種抗原的抗體批量化制備等優(yōu)勢,成為制備人源抗體的研究手段。目前人源抗體篩選技術主要依賴噬菌體抗體庫技術[1],但后續(xù)生產(chǎn)仍要依賴

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 王丁丁;許天敏;余麗江;蘇曼曼;黃樹林;宿曉云;陳磊;顏煒群;;應用畢赤酵母分泌表達篩選人抗狂犬病毒抗體scFv-Fc[J];吉林大學學報(醫(yī)學版);2007年06期

2 常亮;劉曉志;孟雅娟;馬志s，

本文編號：892569