發(fā)布時間：2017-09-21 02:29

  本文關(guān)鍵詞：基于獨特型-抗獨特型玉米赤霉烯酮間接競爭ELISA檢測方法的建立

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【摘要】：目的建立基于獨特型-抗獨特型玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)間接競爭ELISA檢測方法,并進(jìn)行驗證。方法采用Protein G親和層析法純化ZEN的β型抗獨特型單抗1D5(Ab2β-1D5)腹水;以ZEN單抗Fab片段包被酶標(biāo)板,Ab2β-1D5為一抗,建立ZEN的競爭ELISA檢測方法,繪制標(biāo)準(zhǔn)抑制曲線,根據(jù)回歸方程計算半數(shù)抑制濃度(IC50),并確定檢出限(IC10)及線性范圍。以ZEN類似物嘔吐毒素、伏馬毒素、赭曲霉素A代替ZEN作為競爭抗原,用建立的方法進(jìn)行檢測,驗證方法的特異性;配制6個濃度的ZEN溶液(20、30、40、50、60和75 ng/ml),用建立的方法進(jìn)行檢測,計算試驗內(nèi)及試驗間回收率和變異系數(shù)(CV),驗證方法的準(zhǔn)確性和精密性。結(jié)果 Ab2β-1D5單抗的純化效果較好,濃度為4 mg/ml,效價為1∶6×104;ZEN單抗Fab片段的最佳包被濃度為1μg/ml。建立的ZEN競爭ELISA檢測方法的線性回歸方程為:y=-34.099 x+81.857,R2=0.994 4,IC50為8.60 ng/ml,IC10為0.58 ng/ml,線性范圍為0.58~128.03 ng/ml;該方法檢測ZEN類似物伏馬毒素、赭曲霉素A和嘔吐毒素的交叉反應(yīng)率均小于0.01%;檢測不同濃度ZEN的試驗內(nèi)平均回收率在98.65%~113.45%之間,試驗間平均回收率在82.96%~98.00%之間;試驗內(nèi)CV值在0.48%~6.40%之間,試驗間CV值在0.94%~8.27%之間。結(jié)論應(yīng)用ZEN單抗的Fab片段和ZEN的β型抗獨特型單抗建立了ZEN的間接競爭ELISA檢測方法,該方法特異性較強,準(zhǔn)確性和精密性良好,且成本較低,快速簡便,易于標(biāo)準(zhǔn)化,適用于樣品的大量篩選。
【作者單位】： 暨南大學(xué)廣東省分子免疫與抗體工程重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： 玉米赤霉烯酮 單克隆抗體 Fab片段 β型抗獨特型單抗 間接競爭酶聯(lián)免疫吸附測定
【基金】：廣東省科技計劃項目(2012A020200003) 暨南大學(xué)國家級大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計劃項目(1210559005)
【分類號】：R392-33
【正文快照】： 玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)又稱F-2毒素,是一種類雌激素樣真菌毒素,具有較強的生殖毒性和致畸作用,可引起動物發(fā)生雌激素亢進(jìn)癥,導(dǎo)致動物不孕或流產(chǎn),給畜牧業(yè)帶來很大的經(jīng)濟損失。ZEN除具有較強的雌激素活性外,還具有細(xì)胞毒性[1-2]、免疫毒性[3-4]、肝毒性[5]、潛在致癌性

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號：891855