本文關(guān)鍵詞：電穿孔介導馬爾尼菲青霉轉(zhuǎn)化體系的建立和優(yōu)化

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【摘要】：目的建立和優(yōu)化馬爾尼菲青霉電穿孔轉(zhuǎn)化體系,為其基因功能研究提供良好平臺。方法直接使用馬爾尼菲青霉缺陷株SPM4(pyrG-,niaD-)萌發(fā)孢子進行電穿孔轉(zhuǎn)化,并通過改變孢子齡、孢子萌發(fā)時間、質(zhì)粒濃度、電場強度等影響因素對體系進行優(yōu)化。結(jié)果適合SPM4電穿孔轉(zhuǎn)化條件為:孢子齡為6 d,孢子萌發(fā)時間為4 h,電場強度為5 kV/cm。上述條件下分別使用1μg環(huán)狀或線性化質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化SPM4,平均可得到21個和13個轉(zhuǎn)化子。結(jié)論馬爾尼菲青霉電穿孔轉(zhuǎn)化效率高,重復性好,針對SPM4萌發(fā)孢子,環(huán)狀質(zhì)粒較線性化質(zhì)粒電穿孔轉(zhuǎn)化效率高。
【作者單位】： 中山大學孫逸仙紀念醫(yī)院;貴陽醫(yī)學院基礎醫(yī)學院;
【關(guān)鍵詞】： 馬爾尼菲青霉 萌發(fā)孢子 電穿孔
【基金】：國家自然科學基金(81171545)
【分類號】：R379.9
【正文快照】： 馬爾尼菲青霉是一種雙相型真菌,室溫培養(yǎng)時以菌絲形態(tài)生長,37℃培養(yǎng)或感染人體后以酵母細胞形態(tài)生長,感染人體后可引起一種嚴重的深部真菌病,該病在免疫受損患者尤其是HIV感染患者中多見[1]。有研究表明,馬爾尼菲青霉的致病性與acuD、hsp 70和hsp 90等基因有關(guān)[2-4]。通過克隆

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本文編號：874229