本文關(guān)鍵詞：成年大鼠心肌細(xì)胞分離培養(yǎng)及興奮-收縮耦聯(lián)表征

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【摘要】：目的比較兩種細(xì)胞分離液分離成年大鼠心肌細(xì)胞,進(jìn)一步表征成年大鼠心室肌細(xì)胞興奮-收縮耦聯(lián)。方法 Langendorff裝置進(jìn)行主動(dòng)脈逆流灌流,分別用兩種細(xì)胞分離液分離成年大鼠心肌細(xì)胞,無血清培養(yǎng)并進(jìn)行腺病毒感染。顯微鏡下觀察單個(gè)心肌細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特點(diǎn),熒光顯微鏡下檢測病毒感染。采用IonOptix儀器檢測心肌細(xì)胞肌節(jié)收縮-舒張指標(biāo)以及心肌細(xì)胞鈣離子攝入-排出指標(biāo)。結(jié)果兩種分離液均可獲得70%橫紋清晰的長桿狀心肌細(xì)胞,培養(yǎng)可存活7 d以上。腺病毒感染48 h,綠色熒光蛋白持續(xù)表達(dá)7 d以上。分離液一獲得的心肌細(xì)胞不能很好地隨電場刺激產(chǎn)生收縮,分離液二獲得的細(xì)胞可用于檢測興奮-收縮耦聯(lián)特性,心肌細(xì)胞肌節(jié)縮短分?jǐn)?shù)為11.61%±2.15%,舒張時(shí)間為(0.177±0.031)s,鈣瞬變幅度為30.79%±9.74%,鈣瞬變衰減時(shí)間為(0.300±0.074)s。結(jié)論兩種分離液均可用于分離和培養(yǎng)成年大鼠心肌細(xì)胞,并用于腺病毒轉(zhuǎn)染等長時(shí)程研究。分離液二更適用于檢測成年大鼠心肌細(xì)胞的興奮-收縮耦聯(lián)特性。
【作者單位】： 北京大學(xué)第三醫(yī)院心內(nèi)科血管醫(yī)學(xué)研究所 衛(wèi)生部心血管分子生物學(xué)與調(diào)節(jié)肽重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 分子心血管學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 心血管受體研究北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 心肌細(xì)胞 成年大鼠 分離 培養(yǎng) 興奮-收縮耦聯(lián)
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81100164、81070078、81270157) 高等學(xué)校博士學(xué)科點(diǎn)專向科研基金(20100001110101、20110001120015)
【分類號】：R329
【正文快照】： 目前,心肌細(xì)胞是心臟疾病研究主要應(yīng)用的細(xì)胞模型,乳鼠心肌細(xì)胞分離和培養(yǎng)的技術(shù)方法非常成熟并被廣泛接受。但是乳鼠心肌細(xì)胞與成體心肌細(xì)胞相比,其結(jié)構(gòu)和功能都存在極大的差異,尤其是利用乳鼠心肌細(xì)胞培養(yǎng)來研究心肌細(xì)胞電生理存在著很大的局限性,因此人們開始探索成體心肌

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本文編號：858274