發(fā)布時間：2017-09-14 22:07

  本文關(guān)鍵詞：口服CD226 DNA疫苗對小鼠免疫功能的影響

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【摘要】：目的制備口服CD226 DNA疫苗,觀察該疫苗對小鼠免疫功能的影響。方法以質(zhì)粒CD226-PCR2.1-ToPo為模板,PCR擴增CD226基因,克隆至pcDNA3.1載體,構(gòu)建真核表達質(zhì)粒pcDNA3.1-CD226,利用脂質(zhì)體LipofectamineTM2000瞬時轉(zhuǎn)染CT-26細胞株,采用RT-PCR法、Western blot法、流式細胞術(shù)檢測CD226基因在CT-26細胞中的表達。將質(zhì)粒pcDNA3.1-CD226用脂質(zhì)體Lipofectamine TM2000包裹制成CD226 DNA疫苗(100μg質(zhì)粒/100μl脂質(zhì)體),經(jīng)灌胃免疫C57BL/6小鼠,實驗分CD226疫苗組、pcDNA3.1組和生理鹽水組,流式細胞術(shù)檢測CD226在小鼠脾細胞中的表達;還原酶法檢測NO分泌水平;乳酸脫氫酶釋放法檢測NK細胞殺傷活性;ELISA法檢測脾細胞培養(yǎng)上清中細胞因子(IL-2、IL-4、IFNγ和TNF-α)分泌水平;Real-time PCR法檢測腸黏膜組織內(nèi)細胞因子表達水平。結(jié)果質(zhì)粒pcDNA3.1-CD226經(jīng)雙酶切及測序鑒定,證明構(gòu)建正確;質(zhì)粒pcDNA3.1-CD226轉(zhuǎn)染CT-26細胞的轉(zhuǎn)染率為32.14%,轉(zhuǎn)染的CT-26細胞檢測到CD226蛋白表達。CD226疫苗組CD226 CD4+T細胞的絕對數(shù)、NK細胞殺傷活性、NO分泌水平、脾細胞培養(yǎng)上清中TNF-α、IFNγ和IL-2分泌水平、腸黏膜組織內(nèi)TNF-α和IFNγ基因mRNA水平均明顯高于pcDNA3.1組和生理鹽水組(P0.05);而CD226疫苗組脾細胞培養(yǎng)上清中IL-4分泌水平及腸黏膜組織內(nèi)IL-2和IL-4基因mRNA水平,與pcDNA3.1組和生理鹽水組相比,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論 CD226DNA疫苗經(jīng)灌胃免疫,可誘導小鼠全身Th1型免疫應答增強和腸道局部部分Th1型免疫應答增強。
【作者單位】： 中國醫(yī)科大學基礎(chǔ)醫(yī)學院免疫教研室;遼寧衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學院免疫教研室;
【關(guān)鍵詞】： CD DNA疫苗 口服 免疫應答
【基金】：國家自然科學基金項目(31270972) 遼寧省科學技術(shù)計劃項目(2011415052-1)
【分類號】：R392.11
【正文快照】： CD226分子又稱為血小板T細胞活化抗原l(platelet and T cell activation antigen 1,PTA1),主要表達于活化的T細胞、NK細胞和血小板等。CD226與其配體CDl55和CD112相互作用,參與血小板凝集、巨核細胞分化、內(nèi)皮細胞黏附、CTL細胞和NK細胞的細胞殺傷等過程[1]。在發(fā)現(xiàn)早期CD226

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 王曉夢;于津浦;李慧;于文文;任秀寶;曹水;;IL-2+IL-15組合培養(yǎng)方案對乳腺癌患者外周血中NK細胞體外擴增的效果[J];中國腫瘤生物治療雜志;2013年06期

2 張曉燕;余琦;白雪娟;梁艷;李寧;吳雪瓊;;結(jié)核病DNA疫苗的研究進展[J];醫(yī)學綜述;2014年11期

3 李巖;桑力軒;朱俊豐;楊芳莉;王大南;李勝軍;孫遜;呂昌龍;;口服結(jié)核Ag85A-CD226 DNA疫苗在小鼠脾與腸道的表達水平檢測[J];微生物學免疫學進展;2014年03期

4 王嬋;王新敏;季榕;張宇晴;王飛雨;吳江東;吳芳;張萬江;章樂;;傳統(tǒng)BCG初免IL-12聯(lián)合Ag85A DNA疫苗加強序貫免疫小鼠效果觀察[J];中國人獸共患病學報;2014年10期

5 趙霞;陳茜;劉U喡，

本文編號：852587