發(fā)布時間：2017-09-09 17:50

  本文關(guān)鍵詞：人細小病毒B19 VP1u多克隆抗體的制備及其保守區(qū)外N端氨基酸對sPLA2活性影響的初步研究

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【摘要】：【目的】制備人細小病毒B19-VP1u的多克隆抗體,探究VP1u多克隆抗體及其保守區(qū)外N端氨基酸對病毒磷脂酶A2活性的影響。【方法】首先通過分子克隆方法構(gòu)建相應(yīng)原核表達載體;利用原核表達系統(tǒng)純化含MBP標簽的VP1u全長及N端系列截短突變?nèi)诤系鞍?接著免疫新西蘭大白兔制備全長VP1u蛋白的多克隆抗體;最后利用磷脂酶A2活性檢測試劑盒檢測了純化蛋白的磷脂酶A2活性。【結(jié)果】Western blot及免疫熒光實驗證實制備的多克隆抗體具有較高的特異性;磷脂酶A2活性檢測發(fā)現(xiàn)全長VP1u-MBP融合蛋白具有一定的活性,該活性可以被VP1u的抗體抑制;N端保守區(qū)外截短系列蛋白的酶活檢測發(fā)現(xiàn),N端截掉12個氨基酸時酶活降低53%,截掉67個氨基酸時酶活性幾乎完全喪失�！窘Y(jié)論】首次發(fā)現(xiàn)VP1u保守區(qū)外N端氨基酸,尤其是第12個氨基酸前的區(qū)域以及第22-67個氨基酸之間的區(qū)域,對sPLA2活性的保持具有重要意義,推測該區(qū)域可能對維持正常的蛋白構(gòu)象起重要的作用;而其特異性多克隆抗體的制備也為進一步研究B19病毒VP1u在病毒復(fù)制周期的作用奠定基礎(chǔ)。
【作者單位】： 華中師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;武漢生物工程學(xué)院生物工程系;
【關(guān)鍵詞】： 人細小病毒B VPu 多克隆抗體 磷脂酶A
【基金】：國家自然科學(xué)基金面上項目(No.30670081)
【分類號】：R392
【正文快照】： 人細小病毒B19(Human parvovirus B19,HPV-B19),屬于紅細胞病毒屬(Erythrovirus),細小病毒亞科(Parvovirinae),它和2005年Allander發(fā)現(xiàn)的人博卡病毒(Human Bocavirus)是目前為止能夠感染人類的僅有的兩種已經(jīng)確定的細小病毒科成員[1]。B19能感染兒童及成年人并引起一系列的疾

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

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【相似文獻】

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本文編號：821894