本文關(guān)鍵詞：乙型肝炎病毒實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立

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【摘要】：目的建立一種采用Lightcycler系統(tǒng)進(jìn)行HBV DNA實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法,并探討其臨床應(yīng)用價(jià)值。方法針對(duì)HBV基因組S區(qū)設(shè)計(jì)一對(duì)擴(kuò)增引物,并通過預(yù)實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格優(yōu)化反應(yīng)體系的組成和條件;將T載體與HBV RT區(qū)擴(kuò)增后純化的產(chǎn)物進(jìn)行連接反應(yīng),然后轉(zhuǎn)染大腸桿菌(DH5α),經(jīng)藍(lán)、白斑篩選后挑取陽性菌落,提取質(zhì)粒,制備外標(biāo)準(zhǔn)品。結(jié)果用于制成外標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)粒經(jīng)1∶10的緩沖液倍比稀釋,制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,線性方程為:Y=-3.344 X+37(r2=0.999 9);通過檢測(cè)已知濃度并經(jīng)倍比稀釋的HBV DNA,表明其最低檢測(cè)限為5×102 IU/mL;拷貝數(shù)介于5×102~5×108 IU/mL之間的HBV DNA濃度與Ct值具有良好的線性關(guān)系。結(jié)論外標(biāo)法實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種定量相對(duì)準(zhǔn)確、靈敏度高、特異性強(qiáng)、操作相對(duì)簡(jiǎn)便的方法;該方法可用于乙型肝炎患者病情監(jiān)測(cè),有效指導(dǎo)臨床用藥;聯(lián)合該法與血清標(biāo)志物檢測(cè),可更準(zhǔn)確評(píng)價(jià)HBV感染者病情。
【作者單位】： 武漢大學(xué)人民醫(yī)院檢驗(yàn)科;
【關(guān)鍵詞】： 肝炎病毒 乙型 聚合酶鏈反應(yīng) 質(zhì)粒
【分類號(hào)】：R373.21
【正文快照】： HBV屬于嗜肝DNA病毒科的雙鏈DNA病毒,它可引起急、慢性肝炎。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì),全球約有20億人感染HBV,且有3.5億人處于持續(xù)感染的狀態(tài),每年全球因肝細(xì)胞癌或肝衰竭死亡的患者約有100萬人[1]。因此,HBV感染的治療一直是臨床上占據(jù)重要地位的議題。由于患者血清中的HBV載量與

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本文編號(hào)：809696