本文關(guān)鍵詞：穩(wěn)轉(zhuǎn)STAT6-RNAi細(xì)胞株的構(gòu)建及功能鑒定

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【摘要】：目的探討RNAi慢病毒載體對(duì)HepG2穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株增殖、遷移的影響。方法感染實(shí)驗(yàn)分為4組:空白對(duì)照組(未經(jīng)處理的HepG2細(xì)胞),陰性對(duì)照組(只感染pLVTHm空病毒),感染pLVTHm-STAT6-RNAi組,感染pLVTHm-STAT6-ORF組。運(yùn)用病毒感染HepG2細(xì)胞獲得穩(wěn)定表達(dá)STAT6-ORF和STAT6-RNAi的細(xì)胞株,利用PCR和Western blot的方法檢測(cè)穩(wěn)定細(xì)胞株中STAT6的表達(dá)豐度。CCK-8法檢測(cè)穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的細(xì)胞活性及Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞遷移能力變化。結(jié)果通過(guò)TET的篩選,成功獲得了STAT6-ORF以及STAT6-RNAi的HepG2穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株。與對(duì)照組細(xì)胞相比,過(guò)表達(dá)STAT6-ORF轉(zhuǎn)染的細(xì)胞增殖快(F=4.279,P=0.021),遷移率高;而STAT6-RNAi轉(zhuǎn)染后,細(xì)胞增殖緩慢,隨培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)及傳代(HepG2傳到第三代細(xì)胞絕大部分細(xì)胞已經(jīng)死亡),細(xì)胞逐漸崩解、漂浮死亡,細(xì)胞活性顯著降低(F=290.114,P0.001),遷移能力顯著下降。結(jié)論成功構(gòu)建STAT6-RNAi和STAT6-ORF穩(wěn)定株,為后期建立動(dòng)物模型,體內(nèi)驗(yàn)證STAT6的生物學(xué)功能奠定了物質(zhì)基礎(chǔ)。
【作者單位】： 南陽(yáng)市中心醫(yī)院感染科;寧波市感染病醫(yī)院肝病科;
【關(guān)鍵詞】： 慢病毒包裝 STAT RNAi干涉 感染 HepG細(xì)胞
【基金】：2011年浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生計(jì)劃(2011KYB107)
【分類(lèi)號(hào)】：R329.2
【正文快照】： 原發(fā)性肝癌(primary hepatic cancer,PHC)是一種原發(fā)于膽管細(xì)胞或肝細(xì)胞的癌癥,是臨床上最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,全球發(fā)病率居惡性腫瘤第五位。近年來(lái),隨著環(huán)境因素和社會(huì)因素的改變,肝癌的發(fā)病率也明顯提高,而且患者年齡呈年輕化趨勢(shì)。研究表明,腫瘤細(xì)胞及其周?chē)庖呒?xì)胞分泌的

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本文編號(hào)：799921