本文關(guān)鍵詞：穩(wěn)轉(zhuǎn)STAT6-RNAi細胞株的構(gòu)建及功能鑒定

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【摘要】：目的探討RNAi慢病毒載體對HepG2穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株增殖、遷移的影響。方法感染實驗分為4組:空白對照組(未經(jīng)處理的HepG2細胞),陰性對照組(只感染pLVTHm空病毒),感染pLVTHm-STAT6-RNAi組,感染pLVTHm-STAT6-ORF組。運用病毒感染HepG2細胞獲得穩(wěn)定表達STAT6-ORF和STAT6-RNAi的細胞株,利用PCR和Western blot的方法檢測穩(wěn)定細胞株中STAT6的表達豐度。CCK-8法檢測穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株的細胞活性及Transwell實驗檢測穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞遷移能力變化。結(jié)果通過TET的篩選,成功獲得了STAT6-ORF以及STAT6-RNAi的HepG2穩(wěn)定表達細胞株。與對照組細胞相比,過表達STAT6-ORF轉(zhuǎn)染的細胞增殖快(F=4.279,P=0.021),遷移率高;而STAT6-RNAi轉(zhuǎn)染后,細胞增殖緩慢,隨培養(yǎng)時間延長及傳代(HepG2傳到第三代細胞絕大部分細胞已經(jīng)死亡),細胞逐漸崩解、漂浮死亡,細胞活性顯著降低(F=290.114,P0.001),遷移能力顯著下降。結(jié)論成功構(gòu)建STAT6-RNAi和STAT6-ORF穩(wěn)定株,為后期建立動物模型,體內(nèi)驗證STAT6的生物學功能奠定了物質(zhì)基礎(chǔ)。
【作者單位】： 南陽市中心醫(yī)院感染科;寧波市感染病醫(yī)院肝病科;
【關(guān)鍵詞】： 慢病毒包裝 STAT RNAi干涉 感染 HepG細胞
【基金】：2011年浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生計劃(2011KYB107)
【分類號】：R329.2
【正文快照】： 原發(fā)性肝癌(primary hepatic cancer,PHC)是一種原發(fā)于膽管細胞或肝細胞的癌癥,是臨床上最常見的惡性腫瘤之一,全球發(fā)病率居惡性腫瘤第五位。近年來,隨著環(huán)境因素和社會因素的改變,肝癌的發(fā)病率也明顯提高,而且患者年齡呈年輕化趨勢。研究表明,腫瘤細胞及其周圍免疫細胞分泌的

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本文編號：799921