本文關鍵詞：HCV1b型core蛋白對Huh7細胞Plk1、CDK1表達的影響

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【摘要】：目的:本文主要研究HCV1b型core蛋白對Huh7細胞Plk1、CDK1表達的影響,以探討HCV core與細胞周期的關系及可能的機制。方法:1.用脂質體介導技術將重組質粒pcDNA3.1(-)-core轉染至Huh7細胞中,同時設置未轉染和轉染空載體的Huh7細胞作為對照組;脂質體介導將HCV core干擾質粒pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-core和pcDNA3.1(-)-core質粒共同轉染至Huh7細胞中,同時設置未轉染、轉染miR-negative和轉染core+miR-negative的Huh7細胞作為對照組。運用RT-PCR和Western blot檢測轉染細胞中core、Plk1和CDK1mRNA及蛋白的表達;MTT法檢測HCV core對Huh7細胞增殖的影響;流式細胞術檢測Huh7細胞周期變化情況。結果:1.RT-PCR和Western blot檢測到重組質粒pcDNA3.1(-)-core在Huh7細胞內成功表達。2.Huh7/core組中Plk1、CDK1 mRNA和蛋白的相對表達量高于Huh7組、Huh7/空載體組(P0.05),Huh7組和Huh7/空載體組之間比較無統(tǒng)計學差異(P0.05);Huh/core+miR-negative組中Plk1、CDK1mRNA和蛋白的相對表達量高于Huh7組、Huh7/miR-negative組和Huh7/core+miR-core組(P0.05),其余組之間比較無統(tǒng)計學差異(P0.05)。3.MTT法檢測Huh7細胞轉染1-5天后,Huh7/core組細胞生長速度快于Huh7組、Huh7/空載體組(P0.05),Huh7組和Huh7/core組之間比較無統(tǒng)計學差異(P0.05);Huh/core+miR-negative組細胞生長速度快于Huh7組、Huh7/miR-negative組和Huh7/core+miR-core組(P0.05),其余兩組之間的細胞生長速度相比較無統(tǒng)計學差異(P0.05)。4.Huh7/core組與Huh7組和Huh7/空載體相比,G0/G1期、S期細胞數減少,G2/M期細胞數增多(P0.05),Huh7組和Huh7/空載體組之間比較無統(tǒng)計學差異(P0.05);Huh/core+miR-negative組與Huh7組、Huh7/miR-negative組和Huh7/core+miR-core組相比,G0/G1期、S期細胞數減少,G2/M期細胞數增多(P0.05),其余兩組之間比較無統(tǒng)計學差異(P0.05)。結論:HCV core蛋白通過上調Huh7細胞中的Plk1、CDK1的表達,促進細胞進入G2/M期,從而加速細胞周期進程,促進細胞增殖。
【關鍵詞】：丙型肝炎病毒 核心蛋白 Plk1 CDK1
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R373.21
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-12
• 第1章 緒論12-14
• 第2章 材料與方法14-26
• 2.1 實驗方法14-18
• 2.2 實驗方法18-26
• 第3章 實驗結果26-36
• 3.1 HCV core的mRNA和蛋白表達26
• 3.2 Plk1及CDK1的mRNA相對表達量26-29
• 3.3 Plk1及CDK1的蛋白相對表達量29-31
• 3.4 MTT法檢測細胞增殖31-33
• 3.5 流式細胞術檢測細胞周期33-36
• 第4章 討論36-40
• 第5章 結論40-42
• 參考文獻42-46
• 綜述46-56
• 參考文獻51-56
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文56-58
• 致謝58

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