本文關(guān)鍵詞：CD59促進(jìn)LAT介導(dǎo)的T細(xì)胞活化

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【摘要】：目的:研究CD59分子在LAT(Linker for activated T cells)介導(dǎo)的T系淋巴細(xì)胞活化中所起的作用。方法:構(gòu)建LAT-GFP融合蛋白,以逆轉(zhuǎn)錄病毒為載體轉(zhuǎn)染Jurkat細(xì)胞,建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株(Jurkat-GFP)。分別使用CD59抗體刺激和pSUPER-siCD59干擾質(zhì)粒(GFP標(biāo)記)沉默Jurkat-GFP細(xì)胞。免疫熒光觀察CD59和LAT分子在細(xì)胞膜的表達(dá)和定位;MTT比色法檢測細(xì)胞增殖率的變化;Western blot檢測LAT活化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中相關(guān)蛋白分子磷酸化水平。結(jié)果:熒光顯微鏡下可見Jurkat-GFP細(xì)胞綠色熒光表達(dá)于細(xì)胞膜,轉(zhuǎn)染干擾質(zhì)粒后細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)均有綠色熒光表達(dá)。激光共聚焦顯微鏡下可見CD59抗體刺激前CD59和LAT分子均勻分布于細(xì)胞膜,且轉(zhuǎn)染干擾質(zhì)粒的Jurkat-GFP細(xì)胞CD59表達(dá)量下降。CD59抗體刺激后CD59分子和LAT分子點(diǎn)狀聚集共定位于細(xì)胞膜。MTT結(jié)果表明相對于正常Jurkat-GFP細(xì)胞,抗體活化后細(xì)胞增殖速率明顯升高(P0.05),而電轉(zhuǎn)干擾質(zhì)粒后細(xì)胞生長減慢。Western blot結(jié)果表明,CD59抗體刺激后細(xì)胞ZAP-70、LCK、PLC-r總蛋白表達(dá)無明顯差異(P0.05),而磷酸化蛋白表達(dá)顯著增高(P0.05)。結(jié)論:抗體活化后細(xì)胞膜上CD59和LAT分子聚集并共定位于細(xì)胞膜,且細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路下游分子磷酸化水平增高,進(jìn)一步證實(shí)CD59分子經(jīng)抗體活化后可促進(jìn)LAT介導(dǎo)的T細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。
【作者單位】： 青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： CD LAT Jurkat siCD 蛋白磷酸化
【基金】：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.H1003)資助
【分類號】：R392.11
【正文快照】： CD59相對分子量18~20 kD,其基因定位于人類第11號染色體短臂上,配體為CD2。廣泛表達(dá)于人外周血白細(xì)胞、紅細(xì)胞和其他多種細(xì)胞,缺乏胞內(nèi)段,通過棕櫚酰基團(tuán)錨固于細(xì)胞膜。細(xì)胞活化后CD59分子被募集于細(xì)胞膜脂筏(Lipid rafts)區(qū)域。CD59抗體在共刺激信號存在下可誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞早，

本文編號：787434