本文關鍵詞：CD59促進LAT介導的T細胞活化

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【摘要】：目的:研究CD59分子在LAT(Linker for activated T cells)介導的T系淋巴細胞活化中所起的作用。方法:構建LAT-GFP融合蛋白,以逆轉(zhuǎn)錄病毒為載體轉(zhuǎn)染Jurkat細胞,建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株(Jurkat-GFP)。分別使用CD59抗體刺激和pSUPER-siCD59干擾質(zhì)粒(GFP標記)沉默Jurkat-GFP細胞。免疫熒光觀察CD59和LAT分子在細胞膜的表達和定位;MTT比色法檢測細胞增殖率的變化;Western blot檢測LAT活化信號轉(zhuǎn)導通路中相關蛋白分子磷酸化水平。結(jié)果:熒光顯微鏡下可見Jurkat-GFP細胞綠色熒光表達于細胞膜,轉(zhuǎn)染干擾質(zhì)粒后細胞膜和細胞質(zhì)均有綠色熒光表達。激光共聚焦顯微鏡下可見CD59抗體刺激前CD59和LAT分子均勻分布于細胞膜,且轉(zhuǎn)染干擾質(zhì)粒的Jurkat-GFP細胞CD59表達量下降。CD59抗體刺激后CD59分子和LAT分子點狀聚集共定位于細胞膜。MTT結(jié)果表明相對于正常Jurkat-GFP細胞,抗體活化后細胞增殖速率明顯升高(P0.05),而電轉(zhuǎn)干擾質(zhì)粒后細胞生長減慢。Western blot結(jié)果表明,CD59抗體刺激后細胞ZAP-70、LCK、PLC-r總蛋白表達無明顯差異(P0.05),而磷酸化蛋白表達顯著增高(P0.05)。結(jié)論:抗體活化后細胞膜上CD59和LAT分子聚集并共定位于細胞膜,且細胞信號轉(zhuǎn)導通路下游分子磷酸化水平增高,進一步證實CD59分子經(jīng)抗體活化后可促進LAT介導的T細胞信號轉(zhuǎn)導。
【作者單位】： 青島大學醫(yī)學院免疫學教研室;
【關鍵詞】： CD LAT Jurkat siCD 蛋白磷酸化
【基金】：國家自然科學基金項目(No.H1003)資助
【分類號】：R392.11
【正文快照】： CD59相對分子量18~20 kD,其基因定位于人類第11號染色體短臂上,配體為CD2。廣泛表達于人外周血白細胞、紅細胞和其他多種細胞,缺乏胞內(nèi)段,通過棕櫚�；鶊F錨固于細胞膜。細胞活化后CD59分子被募集于細胞膜脂筏(Lipid rafts)區(qū)域。CD59抗體在共刺激信號存在下可誘導T淋巴細胞早，

本文編號：787434