本文關(guān)鍵詞：銅綠假單胞菌外毒素A基因突變體的構(gòu)建及其在大腸埃希菌中的表達

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【摘要】：目的將銅綠假單胞菌外毒素A(Pseudomonas aeruginosa exotoxin A,PEA)基因突變?yōu)闊o毒性的ntPE基因,并在大腸埃希菌中進行表達。方法利用Primer Premier 5.0軟件設(shè)計PEA基因引物及PEA基因第553位氨基酸缺失的突變引物,以銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa,P.aeruginosa)基因組DNA為模板,PCR擴增PEA基因,插入pGEM-T載體中,構(gòu)建重組克隆質(zhì)粒pGEM-PEA,以其為模板,利用突變引物,擴增ntPE基因(無毒性PEA),插入pET-30a載體中,構(gòu)建原核表達質(zhì)粒pET-ntPE,轉(zhuǎn)化大腸埃希菌BL21(DE3),IPTG誘導(dǎo)表達,表達產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE及Western blot分析。結(jié)果測序結(jié)果證明已成功獲得突變基因;原核表達質(zhì)粒經(jīng)雙酶切鑒定證明構(gòu)建正確;表達的重組蛋白相對分子質(zhì)量約69 000,主要以包涵體形式存在,表達量占菌體總蛋白的30%,可被小鼠抗PEA單克隆抗體特異性識別,具有較好的抗原性。結(jié)論已成功獲得無毒性的PEA突變基因,為構(gòu)建以PEA為蛋白佐劑的融合蛋白疫苗奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 中國疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所衛(wèi)生部醫(yī)學(xué)病毒和病毒病重點實驗室;中國動物疫病預(yù)防控制中心;萊陽市畜牧獸醫(yī)局;
【關(guān)鍵詞】： 銅綠假單胞菌 外毒素 基因 突變體 原核細胞 基因表達
【基金】：艾滋病和病毒性肝炎等重大傳染病防治”科技重大專項(2009ZX10004-710)
【分類號】：R378.991
【正文快照】： 銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa,P.aeru-ginosa)是一種人畜共患的條件性致病菌,并在自然界中廣泛存在,具有多種血清型,可產(chǎn)生多種致病因子。銅綠假單胞菌外毒素A(Pseudomonas aeruginosaexotoxin A,PEA)是由銅綠假單胞菌分泌的細胞毒性外毒素,成熟的毒素分子是由638個氨

【共引文獻】

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 陳豪泰;口蹄疫基因工程病毒拯救及其舌下免疫研究[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 金人一;;嵌合毒素能阻止免疫反應(yīng)[J];生物技術(shù)通報;1989年11期

2 朱遐;;CD4-毒素結(jié)合物可選擇性殺傷HIV侵染細胞[J];生物技術(shù)通報;1989年05期

3 廖樂樂;婁世鋒;曾翰慶;白鳳霞;;高純度白介素-3與假單胞菌外毒素融合蛋白的表達、純化及質(zhì)譜鑒定[J];生物技術(shù)通報;2010年06期

4 孫雷心;;近期專利集錦[J];生物技術(shù)通報;1997年03期

5 杜娟;胡紅剛;侯玲玲;;IL-13Rα2介導(dǎo)的毒素融合蛋白在腫瘤治療中的應(yīng)用[J];中國生物工程雜志;2009年04期

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 廖樂樂;高純度白介素-3與假單胞菌外毒素融合蛋白的表達、純化及質(zhì)譜鑒定[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2010年

2 朱小影;抗慢性粒細胞白血病細胞人源化單鏈抗體—免疫毒素的制備及其生物活性的鑒定[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2012年

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本文編號：779301